液相色谱仪使用方法(高效液相色谱仪的检测器)

Posted 2023-06-01

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液相色谱仪使用方法(高效液相色谱仪的检测器)

高效液相色谱对检测器的要求是灵敏度高、重现性好、线性范围宽、噪声低、定量准确、对温度和流量的变化不敏感等。高效液相色谱的检测器分为两类：一类是通用型检测器又叫总体性检测器，它对试样和流动相总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光检测器和电导检测器。这类检测器使用范围广，但是由于它对试剂也有响应，因此易受温度、流量变化的影响，造成较大的噪声和漂移，不能用于梯度淋洗，灵敏度较低，不适合于痕量分析。另一类是选择性检测器又叫溶质性检测器，它仅对分离组分的物理或化学特性有响应，对流动相无响应或响应很小，如紫外吸收检测器和荧光检测器等都属于这一类。该类检测器灵敏度高，受外界影响小，可用于梯度淋洗，但应用范围受到限制。

紫外-可见吸收检测器

紫外-可见吸收检测器是高效液相色谱仪中使用最广泛的选择性检测器。它的作用原理是待测组分对特定波长的紫外或可见光有选择性吸收，适合于紫外或可见光区有吸收的溶质的测定。检测器输出信号的大小即吸光度与待测组分的浓度之间的关系服从朗伯比尔定律。紫外-可见吸收检测器的优点是具有很高的灵敏度；选择性好；对流量和温度的变化不敏感，适合于梯度淋洗；线性范围宽，能同时检测主要成分和痕量成分。缺点是只适用于检测能吸收紫外、可见光的物质，而且流动相的选择受到限制，要求流动相在测定波长下不能有吸收。

示差折光检测器

示差折光检测器是高效液相色谱中第二个广泛应用的通用型检测器，它的作用原理是连续地监测纯流动相和包含样品的流动相之间的折射率的差值，只要纯流动相与待测组分的折射率不同，检测器就会给出检测信号，其响应信号的大小与样品含量成正比，只要溶质和流动相的折射率有0.1的差异，就能检测到1mg/ml的溶质。原则上凡是与流动相折射率不同的额待测物质都可用此检测器来测定，流动相与待测组分的折射率相差越大，检测器的灵敏度就越高。

荧光检测器

荧光检测器是高效液相色谱中应用较广泛的高灵敏度的选择性检测器。它的作用原理是：具有特殊性结构的化合物受紫外光激发后，能发射出比吸收的紫外光波长较长的光，即荧光，在一定条件下，荧光强度与能产生荧光的物质的浓度呈线性关系。用荧光检测器可检测许多发荧光的物质，某些不发荧光的物质可通过化学衍生技术生成荧光衍生物，也可以用荧光检测器进行检测。因此荧光检测器特备适用于芳香族化合物、生化物质的检测，如有机胺类、氨基酸、维生素、激素、酶等。荧光检测器优点是灵敏度极高，比紫外吸收检测器高10~1000倍，特备适用于痕量分析；线性范围较宽，但比紫外吸收检测器的线性范围要窄；受外界条件影响小，可用于梯度淋洗。缺点是由于是选择性检测器，应用范围受到限制；样品浓度较高时，荧光强度与浓度不再呈线性关系；对影响荧光测量的一些干扰非常敏感。

电导检测器

电导检测器是一种选择性检测器，是离子色谱中应用最广泛的一种检测器。其作用原理是根据某些介质中电离后产生的电导变化来测量电离物质的含量。它的最大缺点是溶液的PH值>7时不够灵敏。

蒸发激光散射检测器

工作原理：色谱柱后流出物在流向检测器的图中，被高速载气喷成雾滴。然后，在受温度控制的蒸发漂移管中，流动相液体不断蒸发，而溶质形成不挥发的微小颗粒，被载气携带通过检测系统。与紫外-可见吸收检测器和示差折光检测器比价，蒸发激光检测器消除了溶剂干扰和因温度变化引起的基线漂移，即使采用梯度洗脱也不会产生基线漂移，另外，该检测器好具有喷雾器、漂移管易于清洗，死体积小，灵敏度高，喷雾器消耗少等优点。

使用示差折光检测器的岛津高效液相色谱仪