洁净室微生物监测项目有(医药工业洁净室(区)浮游菌＆悬浮粒子的测试方法北京中邦兴业)

Posted 2023-05-31

篇首语：发明是百分之一的聪明加百分之九十九的勤奋。本文由小常识网(cha138.com)小编为大家整理，主要介绍了洁净室微生物监测项目有(医药工业洁净室(区)浮游菌＆悬浮粒子的测试方法北京中邦兴业)相关的知识，希望对你有一定的参考价值。

洁净室微生物监测项目有(医药工业洁净室(区)浮游菌＆悬浮粒子的测试方法北京中邦兴业)

医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法（节选自部分）

1. 术语和定义

1.1菌落 colony forming units

微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称 CFU。通常用个数表示

1.2浮游菌 airborne microbe

用本标准提及的方法收集悬浮在空气中的活微生物粒子,通过专门的培养基,在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。

1.3浮游菌浓度 airborne microbe concentration

单位体积空气中含浮游菌菌落数的多少,以计数浓度表示,单位是个/m³或个/L

1.4纠偏限度 action levels

对于受控的洁净室(区),由使用者自行设定微生物含量等级。当检测结果超过该等级时，应启动监测程序对该区域的微生物污染情况立即进行跟踪

1.5警戒限度 alert levels

对于受控的洁净室(区),由使用者自行设定一个微生物含量等级，从而给定了一个与正常状态相比最早警戒的偏差值。当超过该最早警戒的偏差值时，应启动保证工艺或环境不受影响的程序及相关措施。

2. 测试方法

2.1方法提要

本标准采用的方法是计数浓度法。即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门的培养基(选择能证实其能够支持微生物生长的培养基),经若干时间和适宜的生长条件让其繁殖到可见的菌落计数，以判定该洁净室的微生物浓度。

2.2人员的职责及培训

洁净室(区)的测试人员应进行本专业的培训并获得相应资格后才能履行对洁净室(区)测试的职责，其中包含涉及的卫生知识和基本微生物知识。洁净室(区)的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式,外面的衣服不能带进 100 000 级以上的区城

2.3仪器、辅助设备和培养基

选择合适的浮游菌采样器,包括采用无油的抽气泵,较低的气流流速和较大的采样流量，以保证培养基表面的水分不被吹干。

本测试需要具备仪器、辅助设备和培养基如下:

（1）浮游菌采样器

（2）培养皿

（3）培养基(见本标准附录 B)

（4）恒温培养箱

（5）高压蒸汽灭菌器

3. 浮游菌采样器原理

浮游菌采样器一般采用撞击法机理,可分为狭缝式采样器、离心式或针孔式采样器。狭缝式采样器由内部风机将气流吸入,通过采样器的狭缝式平板,将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落。离心式采样器由于内部风机的高速旋转,气流从采样器前部吸入从后部流出,在离心力的作用下,空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固形培养条上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落。针孔式采样器是气流通过一个金属盖吸入,盖子上是密集的经过机械加工的特制小孔，通过风机将收集到的细小的空气流直接撞击到平板培养基表面上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落。

4. 测试要点

4.1必须按照测试仪器的检定周期,定期对仪器作检定。使用校验合格，且在使用有效期内的仪器

4.2测试仪器在未进人被测区域时,若必需,则先清洁表面，或在相应的洁净室内准备和存放(用保护罩或其他适当地外罩保护仪器)。

4.3在 A级洁净室内用纸时，上面应蒙上一张透明不沾尘的覆盖物,在 A级洁净室内不能用铅笔和橡皮。

4.4使用测试仪器时应严格按照仪器说明书操作。

4.5仪器开机,预热至稳定后,方可按仪器说明书的规定对仪器进行校正，同时检查采样流量，并根据采样量设定采样时间。

4.6采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造

4.7采样管严禁渗漏,内壁应光滑。

4.8采样管的长度应根据测点的高度定,尽量减少弯曲

4.9培养皿

一般采用 ⌀90 mmX15 mm 规格的培养。可根据所选用采样器选择合适的培养皿。

离心式采样器采用专用的固形培养条。

4.10培养基

大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)或沙氏培养基(SDA)或其他用户认可并经验证了的培养基。其配制方法见附录 B

4.11恒温培养箱

必须定期对恒温培养箱进行校验

5. 测试步骤

5.1测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒

5.2采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌,用于 A 级洁净室的采样器宜预先放在被测房间内。

5.3用消毒剂擦净培养皿的外表面

5.4采样前,先用消毒剂清洗采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面,采样结束,再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。

5.5采样口及采样管,使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。

5.6采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服,在转盘上放人或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒或戴无菌手套操作。

5.7采样仪器经消毒后先不放入培养皿,开启浮游菌采样器,使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于 5 min,并检查流量并根据采样量调整设定采样时间。

5.8关闭浮游菌采样器,放入培养皿，盖上盖子

5.9置采样口于采样点后,开启浮游菌采样器进行采样。

6. 培养

6.1全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养

6.2采用大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)配制的培养皿经采样后,在 30℃~35℃培养箱中培养,时间不少于2d;采用沙氏培养基(SDA)配制的培养皿经采样后,在 20℃~25℃培养箱中培养，时间不少于5d

6.3每批培养基应有对照试验,检验培养基本身是否污染。可每批选定3 只培养皿作对照培养

7. 菌落计数

用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计,然后用 5~10 倍放大镜检查,有否遗漏。

若平板上有 2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2个或 2个以上菌落计数

8. 注意事项

8.1使用前应仔细检查每个培养皿的质量,培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用

8.2对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录

8.3由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

9. 测试规则

9.1 测试条件

9.1.1在测试之前,要对洁净室(区)相关参数进行预先测试，这类测试将会提供测试悬浮粒子的环境条件，例如:这种预先测试或可包括:

9.1.2温度和相对湿度的测试。洁净室(区)的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应(无特殊要求时，温度在 18 ℃~26℃,相对湿度在 45%~65%为宜)同时应满足测试仪器的使用范围;

9.1.3室内送风量或风速的测试,或压差的测试:

9.1.4高效过滤器的泄漏测试

9.2测试状态

9.2.1静态和动态两种状态均可进行测试。

9.2.2静态测试时，室内测试人员不得多于 2人。

9.2.3浮游菌测试前，被测洁净室(区)由用户决定是否需要预先消毒测试报告中应标明测试时所采用的状态和室内测试人员数

9.3测试时间

9.3.1在空态或静态 a 测试时，对单向流洁净室(区)而言，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于 10 min 后开始。对非单向流洁净室(区),测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30 min 后开始。在静态 b 测试时,对单向流洁净室(区),测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10 min 自净后开始:对非单向流洁净室(区),测试宜在生产操作人员撤离现场并经过 20 min 自净后开始。

9.3.2在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间

9.4浮游菌浓度计算

9.4.1采样点数量及其布置

9.4.1.1最少采样点数目

浮游菌测试的最少采样点数目可参照 GB/T 16292一2010

9.4.1.2采样点的位置

浮游菌的采样点位置可参照 GB/T 16292一2010。

工作区测点位置离地 0.8 m~1.5 m 左右(略高于工作面);

送风口测点位置离开送风面 30 cm 左右;

可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点

9.5采样次数

每个采样点一般采样一次。

9.6采样注意事项

9.6.1对于单向流洁净室(区)或送风口,采样器采样口朝向应正对气流方向;对于非单向流洁净室(区),采样口向上。

9.6.2布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口。

9.6.3采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动。

9.6.4应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染

9.6.5培养皿在用于检测时,为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响。宜同时进行阴性对照试验，每次或每个区域取1个对照皿,与采样皿同法操作但不需暴露采样,然后与采样后的培养皿(TSA 或SDA)一起放入培养箱内培养,结果应无菌落生长

9.7记录

9.7.1测试报告应包含以下内容:

9.7.2测试者的名称和地址，测试日期

9.7.3测试依据:

9.7.4被测洁净室(区)的平面位置(必要时标注相邻区域的平面位置)

9.7.5有关测试仪器及其测试方法的描述:包括测试环境条件,采样点数目以及布置图，测试次数采样流量,或可能存在的测试方法的变更，测试仪器的检定证书等;若为动态测试，则还应记录现场操作人员数量及位置，现场运转设备和数量和位置;

9.7.6测试结果;包括所有统计计算资料

9.8结果计算

9.8.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

9.8.2每个测点的浮游菌平均浓度的计算,见式(1)

9.9结果评定

9.9.1每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定评定标准中的界限。

9.9.2在静态测试时,若某测点的浮游菌平均浓度超过评定标准,则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合

10. 日常监控

10.1对于浮游菌的监控,宜设定纠偏限度和警戒限度沿单一方向呈平行流线并且与气流方向垂直的断面上风速均匀的气流，以保证洁净室(区)的微生物浓度受到控制。应定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效力,并作倾向分析。静态和动态的监控都可以采用该方法。

对于浮游菌的取样频次,如果出现下列情况应考虑修改,在评估以下情况后,也应确定其他项目的检测频次:

——连续超过纠偏限度和警戒限度;

——停工时间比预计延长;

——关键区域内发现有污染存在;

——在生产期间,空气净化系统进行任何重大的维修;

——日常操作记录反映出倾向性的数据;

——消毒规程的改变;

——引起生物污染的事故等;

——当生产设备有重大维修或增加设备时;

——当洁净室(区)结构或区域分布有重大变动时

…………

前言

本标准参考了ISO 14644-1《洁净间以及相关环境控制第1部分：空气洁净度级别》和JGJ 71-90《洁净室施工及验收规范》而制定。

本标准代替GB/T 16292-1996《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》。

本标准与GB/T 16292-1996的主要区别为：

—调整标准规定范围，本标准仅规定测试方法，不对洁净室（区）洁净等级进行评定；

—取消了滤膜显微镜测试方法，改用激光粒子计数器方法；

—增加了确定最少采样点数目的方法；

—增加和提供了更新的资料性附录。

本标准的附录A是规范性附录。

本标准的附录B是资料性附录。

本标准由国家食品药品监督管理局提出并归口。

本标准起草单位：上海市食品药品包装材料测试所。

本标准主要起草人：徐敏凤、纪炜、魏佳鸣、蔡均、韩晗、冯晓明。

本标准所代替标准的历次标本发布情况为：GB/T 16292-1996。

医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法

1 范围

本标准规定了空气悬浮粒子污染的测试方法。

本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或局部空气净化区域（包括洁净工作台）的空气悬浮粒子测试和环境的验证。

本标准不能用于表征物理的、化学的、反射线学的，或空气微粒的可繁殖特性。

注：在采样粒径范围内，随着采样量的增加，实际的微粒浓度是不可预见和随时间变化的。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

YY 0033-2000无菌医疗器具生产管理规范

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1洁净室（区）clean room (zone)

对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构，装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。其他相关参数诸如：温度、湿度、压力也有必要控制。

3.2局部空气净化localized air purification

仅使室内工作区域或特定的局部空间的空气中含悬浮粒子浓度达到规定的空气洁净度级别的方式。

3.3单向流unidirectional airflow

沿单一方向呈平行流线并且与气流方向垂直的断面上风速均匀的气流。与水平面垂直的叫垂直单向流（vertical unidirectional airflow），与水平面平行的叫水平单向流（horizontal unidirectional airflow）。

3.4非单向流non-unidirectional airflow

具有多个通路循环特性或气流方向不平行的气流。

3.5悬浮粒子airborne particle

用于空气洁净度分级的空气悬浮粒子尺寸范围在0.1μm~l000μm的固体和液体粒子。对于悬浮粒子计数测量仪，一个微粒球的面积或体积产生一个响应值，不同的响应值等价于不同的微粒直径。

3.6洁净度cleanliness

洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径悬浮粒子的统计数量来区分的洁净程度。

3.7置信上限（95%UCL）upper confidence limit

从正态分布抽样得到的实际均值按给定的置信度（此处为95%）计算得到的估计上限将大于此实际均值，则称计算得到的这一均值上限为置信上限。

3.8空态as-bulit

洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且完备的情况下，但是没有生产设备、原材料或人员的状态。

3.9静态at-rest

静态a：洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且完备的情况下，生产工艺设备已安装、洁净室（区）内没有生产人员的状态。

静态b：洁净室（区）在生产操作完全结束，生产操作人员撤离现场并经过20min自净后。

3.10动态operational

洁净室（区）已处于正常生产状态，设备在指定的方式下进行，并且有指定的人员按照规范操作。

3.11洁净工作台clean bench

一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，按气流形式分为垂直单向流工作台、水平单向流工作台等。

4 测试方法

4.1方法提要

本方法采用计数浓度法，即通过测试洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径的悬浮粒子数，来评定洁净室（区）的悬浮粒子洁净度级别。

4.2人员的职责及培训

洁净室（区）的测试人员应进行本专业的培训并获得相应资格后才能履行对洁净室（区）测试的职责，其中包含涉及的卫生知识和基本的微生物知识。

洁净室（区）的测试人员应该选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进100000级以上的区域。

4.3仪器

仪器应采用以下任意一种：

a）光散射粒子计数器（用于粒径大于或等于0.5μm的悬浮粒子计数）；

b）激光粒子计数器（用于粒径大于或等于0.1μm的悬浮粒子计数）。

4.3.1光散射粒子计数器原理

空气中的悬浮粒子在光的照射下产生光散射现象，散射光的强度与悬浮粒子的表面积成正比。

4.3.2激光粒子计数器原理

空气中的悬浮粒子在激光束的照射下产生衍射现象，衍射光的强度与悬浮粒子的体积成正比。

4.4测试要点

4.4.1必须按照测试仪器的检定周期，定期对测试仪器作检定。应使用检定合格，且在使用有效期内的仪器。

4.4.2测试仪器在未进入被测区域时，若必需，则先清洁表面，或在相应的洁净室内准备和存放（用保护罩或其它适当地外罩保护仪器）。

4.4.3在100级洁净室内用纸时，上面应蒙上一张透明不沾尘的覆盖物，在100级洁净室内不能用铅笔和橡皮。

4.4.4使用测试仪器时应严格按照仪器说明书操作。

4.4.4.1仪器开机，预热至稳定后，方可按测试仪器说明书的规定对仪器进行校正，同时检查采样流量和等动力采样头。

4.4.4.2采样管口置于采样点采样时，在计数趋于稳定后，开始连续读数。

4.4.4.3采样管必须干净，严禁渗漏。

4.4.4.4采样管的长度应根据仪器的允许长度。除另有规定外，长度不得大于1.5m。

4.4.4.5粒子计数器采样口和仪器工作位置宜处在同一气压和温度下，以免产生测量偏差。

5 测试规则

5.1测试条件

在测试之前，要对洁净室（区）相关参数进行预先测试，这类测试将会提供测试悬浮粒子的环境条件，例如：这种预先测试或可包括：

a）温度和相对湿度的测试。洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃~26℃，相对湿度在45%~65%为宜），同时应满足测试仪器的使用范围；

b）室内送风量或风速的测试，或压差的测试；

c）高效过滤器的泄漏测试。

5.2测试状态

空态，静态和动态三种状态均可进行测试。

空态或静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

测试报告中应标明测试时所采用的状态和室内的测试人员数。

5.3测试时间

5.3.1在空态或静态a测试时，对单向流洁净室（区）而言，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始。对非单向流洁净室（区），测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min开始。在静态b测试时，对单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10min后开始；对非单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。

5.3.2在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。

5.4悬浮粒子计数

5.4.1采样点数目及其布置

在空态或静态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置应力求均匀，并不得少于最少采样点数目，采样点布置规则见附录A。在动态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置。

5.4.1.1最少采样点数目

悬浮粒子测试最少采样点数目可在以下两种方法中任选一种：

式中：

NL—最少采样点；

A—洁净室或被控洁净区的面积，单位为平方米（m2）。

注：在单向流情况下，面积A可以认为是垂直于气流方向上的横截面积。

5.4.1.2采样点的位置

采样点的位置应满足以下要求：

a）采样点一般在离地面0.8m高度的水平面上均匀布置。

b）采样点多于5点时，也可以在离地面0.8m~1.5m高度的区域内分层布置，但每层不少于5点。

5.4.2采样次数的限定

对任何小洁净室（区）或局部空气净化区域，采样点的数目不得少于2个，总采样次数不得少于5次。每个采样点的采样次数可以多于1次，且不同采样点的采样次数可以不同。

5.4.3采样注意事项

5.4.3.1对于单向流洁净室（区），粒子计数器的采样管口应正对气流方向；对于非单向流洁净室（区），粒子计数器的采样管口宜向上。

5.4.3.2布置采样点时，应尽量避开回风口。(原文链接：http://www.iwuchen.com/a-62/)

5.4.3.3采样时，测试人员应在采样口的下风侧，并尽量少活动。

5.4.3.4采样完毕后，宜对粒子计数器进行自净。

5.4.3.5应采取一切措施防止采样过程的污染。

6 结果计算

6.1采样点的平均悬浮粒子浓度A

采样点的平均悬浮粒子浓度A按式（2）计算：

式中：

A—某一采样点的平均粒子浓度，粒每立方米（粒/m3）；

C—某一采样点的粒子浓度（=1,2，…，n），粒每立方米（粒/m3）；

n—某一采样点上的采样次数，次。

6.2平均值的均值M

平均值的均值M按式（3）计算：

式中：

M—平均值的均值，即洁净室（区）的平均粒子浓度，粒每立方米（粒/m3）；

A—某一采样点的平均粒子浓度（=1，2，…，n），粒每立方米（粒/m3）；

L—某一洁净室（区）内的总采样点数，个。

6.3标准差SE

标准差SE按式（4）计算：

式中：

SE—平均值均值的标准误差，粒每立方米（粒/m3）

6.4 95%置信上限（UCL）

95%置信上限（UCL）按式（5）计算：

式中：

UCL—平均值均值的95%置信上限，粒每立方米（粒/m3）；

t—95%置信上限的t分布系数，见表3。

表3 95%置信上限的t分布系数

7 结果评定

判断悬浮粒子的洁净度级别应同时满足以下两个条件：

a）每个采样点的平均悬浮粒子浓度必须不大于规定的级别界限，即Ai≤级别界限；

b）全部采样点的悬浮粒子浓度平均值均值的95%置信上限必须不大于规定的级别界限，即UCL≤级别界限。

8 测试报告

从每一个洁净室（区）得来的测试结果应当被记录，计相一致或不一致的报告也要提交。

测试报告应包括以下内容：

a）测试者的名称和地址，测试日期；

b）测试依据；

c）被测洁净室（区）的平面位置（必要时标注相邻区域的平面位置）；

d）悬浮粒子的粒径；

e）有关测试仪器及其方法的描述：包括测试环境条件，采样点数目以及布置图，测试次数，采样流量，或可能存在的测试方法的变更，测试仪器的检定证书等；若为动态测试，则还应记录现场操作人员数量及位置，现场运转设备数量及位置。

f）测试结果；包括所有统计计算资料。

附录A（规范性附录）洁净室（区）采样点布置

A.1洁净室（区）采样点布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏。下列多点采样的采样点布置图示可作参考。（见图A.1）

A.2 100级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流方向的工作面上，气流形式可参考以下图A.2、图A.3。

最少采样点数目参见5.4.1.1采样点一般在工作面上0.2m高度的平面上均匀布置。

附录B洁净室（区）悬浮粒子的技术要求

各国医药行业不同洁净度级别对悬浮粒子的技术要求见表B.1

表B.1洁净室（间）对悬浮粒子的技术要求（四个洁净度等级）

B.2我国洁净室（间）对悬浮粒子的技术要求（五个洁净度等级），见表B.2。

洁净室微生物监测项目有(医药工业洁净室(区)浮游菌＆悬浮粒子的测试方法北京中邦兴业)

洁净室微生物监测项目有(医药工业洁净室(区)浮游菌＆悬浮粒子的测试方法北京中邦兴业)

医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法

1 范 围

2 规范性引用文件

3 术语和定义

4 测试方法

4.1方法提要

4.2人员的职责及培训

4.3仪器

4.4测试要点

5 测试规则

5.1测试条件

5.2测试状态

5.3测试时间

5.4悬浮粒子计数

6 结果计算

6.1采样点的平均悬浮粒子浓度A

6.2平均值的均值M

6.3标准差SE

6.4 95%置信上限（UCL）

8 测试报告

附录A（规范性附录）洁净室（区）采样点布置

附录B洁净室（区）悬浮粒子的技术要求

1 范围