氯化亚锡溶液是澄清的吗(动物源性食品中农药残留的检测——氨基甲酸酯类农药残留)

Posted 2023-05-30

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氯化亚锡溶液是澄清的吗(动物源性食品中农药残留的检测——氨基甲酸酯类农药残留)

氨基甲酸酯类农药是一类相对新型的广谱杀虫、杀螨、除草剂。这类农药最早是在20世纪50年代出现的，由于高效、广谱、对高等动物毒性低、原料易得、合成简单，近几十年来得到很快发展，自2007年5种高毒有机磷农药的禁用后，氨基甲酸酯类农药成了较主要的替代品种，是国内外一类主要的农药杀虫剂。在我国无公害农产品的生产中，禁止使用涕灭威、克百威、灭多威等高毒氨基甲酸酯类农药。目前报道较多的是蔬菜、水果、粮食等农作物中该类药物的残留测定，动物源性食品中残留分析方法相对较少。本部分主要综述了该类农药的性质、药理与毒理、危害、国内外限量要求以及样品前处理技术及检测方法等，其中多数引用的是农作物中残留检测文献资料，以期为动物源性食品中氨基甲酸酯类农药残留分析提供参考。

1 理化性质

氨基甲酸酯类农药是一类含有氨基甲酸基团的酯类化合物，它的通式如下：

根据取代基R1、R2、R3的不同，氨基甲酸酯类杀虫剂可进一步分为萘基氨基甲酸酯类、苯基氨基甲酸酯类、氨基甲酸肟酯类、杂环甲基氨基甲酸酯类、杂环二甲基氨基甲酸酯类。氨基甲酸酯类农药大多微溶或难溶于水，易溶于乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿等有机溶剂，一般在酸性环境中较稳定，在碱性环境中易分解失效，温度升高和光照可加快分解速度。

常用氨基甲酸酯类杀虫、杀螨剂有甲萘威、克百威、仲丁威、抗蚜威、速灭威、混灭威、异丙威、灭多威、硫双灭多威、涕灭威、甲硫威、残杀威、丙硫克百威、丁硫克百威、唑蚜威、棉铃威、害扑威等，除少数品种如克百威、涕灭威等毒性较高外，大多数属中、低毒性。常用氨基甲酸酯类除草剂有禾草特、禾草丹、灭草猛、野麦畏、燕麦灵、燕麦敌、哌草丹、甜菜安（甜菜灵）、甜菜宁（苯草敌）、茵草敌和丁草特等，有很好的选择性，对人、畜、鱼的毒性较低。

2 药理与毒理

氨基甲酸酯类除草剂的作用机理主要是选择性抑制植物的蛋白质合成，干扰细胞的有丝分裂，从而使杂草死亡，其毒性较低，不易引起人、畜中毒。氨基甲酸酯类杀虫剂对害虫的作用机理是抑制胆碱酯酶的活性，阻断正常神经传导，引起整个生理生化过程的失调，使害虫中毒死亡，具有内吸、触杀、胃毒作用。其作用机理与有机磷杀虫剂相类似，但也有不同，有机磷杀虫剂对胆碱酯酶的抑制是不可逆的，而氨基甲酸酯类杀虫剂对胆碱酯酶的抑制是可逆的。不同结构类型的品种的防治对象及毒性差别也很大，多数品种如异丙威、仲丁威、混灭威、速灭威等的毒性低，由于分子结构接近天然有机物，在自然界中易被分解，残留量低；少数品种如克百威、涕灭威等毒性高。氨基甲酸酯类农药可经消化道、呼吸道和皮肤黏膜进入体内，其中毒的机制主要是抑制神经组织、红细胞及血浆内的乙酰胆碱酯酶，使乙酰胆碱酯酶被氨基甲酰化后失去对乙酰胆碱的水解能力，造成体内乙酰胆碱大量蓄积引起急性中毒。中毒者的主要症状有头晕、头痛、乏力、视力模糊、恶心、呕吐、流涎、多汗、瞳孔缩小等，有的可伴有肌束震颤等烟碱样症状，严重者可出现肺水肿、脑水肿或昏迷。出现中毒时应迅速离开污染源，症状较轻者一般可在数小时内恢复，症状严重者可用阿托品解毒。

3 危害

氨基甲酸酯类农药的毒性比有机氯农药和有机磷农药小，在自然界中可降解。氨基甲酸酯类农药施用后残留于土壤、水源、大气及作物中，对人类及其赖以生存的自然环境产生深远的影响。残留的农药对土壤中的蚯蚓等有益生物产生毒害，残留在蚯蚓体内的农药可通过食物链的传递作用进一步对鸟类和部分小型兽类造成危害。残留在土壤和空气中的农药可伴随着雨水进入水库、河流及鱼塘中，对鱼、虾、蛙等水生生物产生毒害，克百威、仲丁威、异丙威、丙硫克百威、丁硫克百威等对鱼类毒性很大。残留在作物、水果上的农药对蜜蜂、蚕等益虫产生毒害，也可引起人、畜中毒，甲萘威、速灭威、残杀威等对蜜蜂高毒。克百威、涕灭威、灭多威这3种对人、畜有较强毒性的农药在我国已被禁止使用。氨基甲酸酯类除草剂虽对人、畜毒性较低，但在施用过程中如果没有相应的保护措施也可引起工作人员中毒；与此同时，使用除草剂时，如果选用不当，可对施用作物或邻近作物产生药害，影响作物的生长。

4 国内外限量要求

氨基甲酸酯类农药是目前世界上产量最大的农药品种之一，随之而来的毒性和残留问题引起了各国政府的重视。世界各国（包括澳大利亚、加拿大、印度、韩国、新西兰、新加坡、南非、泰国、美国、欧盟国家等）相继针对氨基甲酸酯类农药在农产品中的残留制定了MRL。

欧盟从1991年开始进行农药重新审查工作，至2004年1月决定禁用（撤销）的农药品种达450个，涉及氨基甲酸酯类农药的品种包括虫威、残杀威、胺丙威、苯硫威、丁草威、丁叉威、呋线威、二甲基二硫代氨基甲酸钠、二氧威等。为解决各成员国食品及饲料中农药残留限量标准不一致问题，欧盟于2005年5月颁布了关于“植物和动物源性食品和饲料中农药最大残留标准以及修订理事会91/414/EEC指令的第396/2005号会议与委员会法规”，要求欧盟各成员国必须实施统一的农药MRL标准，对无具体限量标准且不属于豁免物质的农药残留则实施001mg/kg的一律标准。欧盟2007年发布委员会第2007/57/EC号指令，补充理事会第76/895/EEC、86/362/EEC、86/363/EEC和90/642/EEC指令的某些附件，规定了二硫代氨基甲酸酯在蔬菜、水果、谷物、某些动物源性及植物源性食品中的MRL。美国于1994年开始禁止使用粒状克百威，目前禁用及限制使用的氨基甲酸酯类农药包括威百亩、虫威、甲硫威、克百威、灭多威、杀线威、涕灭威等。

2002年我国农业部针对高毒农药的禁用和限用发布了农业部公告第194号和第199号，氨基甲酸酯类农药中高毒的涕灭威、克百威、灭多威被禁止登记并在蔬菜、果树、茶叶、中草药材上限制使用。各国针对食品农药残留限量要求的规定分类非常详细，特别是欧盟国家和美国，表6-5为欧盟国家中已协调的部分氨基甲酸酯类农药的残留限量。

5 样品前处理方法

样品的前处理包括提取和净化，前处理的目的是最大限度地提取目标物质，去除多余的干扰物（杂质），同时尽可能地进行浓缩，以提高检测的灵敏度。氨基甲酸酯类农药是一类分子结构中含有氨基甲酸酯基团的酯类化合物，有弱的极性，在水中不易溶解，易溶于多种有机溶剂。

由于现行检测标准及方法涉及的产品种类较多，包括蔬菜、水果、粮食、坚果、茶叶、肉类、蛋类、乳类、蜂蜜、烟草、饲料、牧草等，而且样品的状态不同，包括液态、固态及半固体状，样品的提取需要分类进行，必要时可在称样前对样品进行适当的处理，如粉碎、匀浆、冻融等。粮食、坚果、茶叶、烟草、饲料等含水量较低的固体样品提取前需要用适当的方法粉碎成粉末或细小颗粒，蔬菜、水果、肉类、蛋类、牧草等含水量较高的固体或半固体样品在提取前需要用适当设备进行匀浆，液态样品（乳类、蜂蜜等）摇匀后可直接称样。

5.1样品提取

用溶剂提取样品的目的是使目标待测物与样品分离，前处理方法的研究主要由被测农药的理化特点、测试样品的状态及最终采用的检测方法所决定，通常提取的溶剂为乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、二氯甲烷、氯仿、石油醚、乙酸乙酯等有机溶剂。乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮等极性较大的有机溶剂能与水互溶，能将样品中水带入提取液中，如果样品的含水量较高，一般需要用盐析（氯化钠、硫酸镁等）的方法或加入能与有机相互溶的弱极性溶剂分离去大部分的水，否则会影响样品浓缩（减压蒸馏）的效率。二氯甲烷、氯仿、石油醚、乙酸乙酯与水不能互溶，带入提取液中的水较少，可采用减压蒸馏浓缩样品，由于对脂肪的溶解力强，能把样品中的脂肪带入提取液中，需要进行除脂肪处理。根据需要，也可选择由两种能混溶的有机溶剂（如乙腈-甲醇、丙酮-二氯甲烷等）或在样品提取时加入适量的无水硫酸钠，以提高提取效率和减少水等杂质的带入。早期的研究曾采用索氏提取的原理提取样品，能有效减少有机溶剂的使用，由于操作繁琐目前已少用。部分配备了超临界流体萃取装置的实验室，采用超临界流体萃取的方法提取样品，对于热敏感的农药能获得较好的回收率和重现性。

5.2样品净化

为达到较低的检出限，提高检测灵敏度和准确度，提取样品后得到的试样溶液需要做适当浓缩和净化。样品经净化处理后，一方面可以将脂肪、蛋白质、色素等动植物样品中的非目标干扰物质更有效地清除，延长色谱柱的使用寿命；另一方面，杂质干扰的减少和样品溶液体积的浓缩能使仪器对样品中的氨基甲酸酯类农药残留的检测灵敏度提高数倍至数十倍。净化的方法主要包括液-液萃取（LLE）、固相萃取（SPE）、超临界流体萃取（SFE）、凝胶渗透色谱（GPC）和基质固相分散法等。

5.2.1液-液萃取（LLE）

LLE法是早期残留检测应用非常普遍的净化方法，主要利用与水或高浓度的无机盐溶液不能互溶的有机溶剂与水相之间进行平衡分配，提取氨基甲酸酯类农药。当农药的极性较小时，经2~3次重复萃取，一般能得到较高的回收率；相反，当农药的极性较大时，由于分配在水相中的农药比例较大，用有机相萃取得到的回收率也相应地下降。LLE法操作简单，耗时少，重复性好，适合样品数较少时使用。Kok等在研究食品中25种氨基甲酸酯类农药及其代谢物时发现，采用LLE法净化时，极性较大的涕灭威亚砜（涕灭威的代谢物）在大多数样品中的回收率均低于30%，而采用固相萃取法净化时，回收率能达90%以上。

5.2.2固相萃取（SPE）

近二十年来，随着SPE技术的不断发展，SPE柱生产技术的提高及产品品种的多元化，为样品中痕量氨基甲酸酯类农药残留的检测提供一种简便的样品净化方法。提取物在SPE柱中经过吸附、淋洗、洗脱等具有选择性的操作步骤之后，试样溶液中大多数非检测目标的物质可被有效除去，在配备了SPE装置之后，可同时对多份样品进行净化，因此SPE更适合于批量样品的净化和浓缩。可选用的SPE小柱包括C18柱、C8柱、阴离子交换柱、阳离子交换柱、混合阳离子交换柱、氧化铝柱、Florisil柱、分子印迹柱等，不同厂家间的产品性能存在一定的差别，在批量使用前需要进行预试。

5.2.3超临界流体萃取（SFE）

SFE是20世纪90年代发展起来的净化技术，它是以液态一氧化碳或二氧化二氮进行萃取，用于农药分析已经越来越普遍。SFE具有其独特的特点：①快速方便，具有选择性；②超临界流体黏度小，扩散能力强，传质速度快，最常用的二氧化碳易于制备，基于不同的压力、改良剂，其溶解范围广，无毒，不燃，可以大量使用；③超临界流体密度、溶解度和黏度都能通过压力来控制；④由于相对低的萃取温度，SFE适于热敏化合物；⑤只要减压就可达到溶剂与萃取物的分离；⑥SFE可与GC、HPLC、超临界流体色谱（SFC）联机；⑦与液体萃取相比，SFE的样品用量小，溶质溶度低，分析时间短。

杨大进等采用丙酮提取大米中的有机磷和氨基甲酸酯类农药，转至分液漏斗中用50g/L的氯化钠溶液处理后再用二氯甲烷分3次萃取混合液中的丙酮和农药，浓缩后进GC-FTD检测，呋喃丹、涕灭威、西维因等氨基甲酸酯类农药的回收率为87%~110%。

Antonio等采用单克隆酶免疫分析法和高效液相柱后衍生荧光法检测黄瓜和草莓中的甲萘威、克百威和甲硫威，采用30mL乙腈与15g黄瓜或草莓样品均质30s，分别加入30mL二氯甲烷和石油醚，再次均质60s，4 000r/min离心5min，转移有机相至刻度量筒，分别精密移取20mL至梨形瓶，30~35℃水浴减压蒸干。一个梨形瓶用10mL水溶解蒸干残留物用于ELIASA法测定，另一个梨形瓶用10mL二氯甲烷溶解过Bond-Elut aminopropyl bondedsilica SPE 柱净化后用于HPLC和ELISA法测定。ELASA法测定的回收率为60%~90%，HPLC法测定的回收率为50%~90%。

梁祈等用50mL正己烷-丙酮（1∶1)浸泡５g粉碎过的中药样品，放置过夜，第二天振荡后离心上清液减压蒸馏至剩3mL后过柱（层析柱由下至上装柱顺序：5g酸性氧化铝，8g弗罗里硅土，约2cm厚无水硫酸钠，用50mL正己烷预淋），先后用50mL正己烷-丙酮（体积比5∶1）和50mL正己烷-丙酮（3∶1，V/V）洗脱，将最初收集的10mL洗脱液弃去，再收集洗脱液90mL浓缩后定容为2mL待测。

时亮等用250mL丙酮提取8g烟末，超声波提取10min，抽滤，在分液漏斗中用50mL蒸馏水和3g氯化钠进行LLE，用石油醚-二氯乙烷（1∶1）的溶液50mL萃取2次，分离有机相，水相再用有机相合并后过7.5g无水硫酸钠，35℃水浴减压蒸发至约2mL过SPE小柱（填有1gsupelcleanLC-Florisil，用前加5mL乙酸乙酯平衡柱子），加入乙酸乙酯-石油醚（3∶2）的混合液淋洗，弃去最初收集的4mL流出液，再收集24mL洗脱液，减压蒸干，加入丙酮定容后进行色谱测定。此外，他们又用吸烟机捕集添加标液的卷烟烟气中的氨基甲酸酯类农药，用丙酮超声提取收集器滤片中的农药，抽滤后再用石油醚-二氯乙烷（1∶1）的溶液萃取2次，合并有机相后水浴减压蒸馏至约2mL，过SPE小柱（填有1gsupelcleanLC-Florisil，用前加5mL乙酸乙酯平衡柱子），加入乙酸乙酯-石油醚（3∶2）混合液淋洗，弃去最初收集的4mL流出液，再收集24mL洗脱液，减压蒸干，加入丙酮定容后进行色谱测定。

林维宣等将20g粉碎的大米用30mL水湿润20min后加100mL丙酮振荡提取30min,滤纸过滤，滤液收集于250mL梨形瓶中，用2×25mL丙酮洗锥形瓶及滤渣，用梨形瓶收集滤液。40℃减压蒸发至约30mL，转移至250mL分液漏斗中，加入10%氯化钠150mL，用100mL二氯甲烷分2次提取，合并二氯甲烷层，经含15g无水硫酸钠柱过滤到250mL梨形瓶中，提取液40℃减压蒸发至约2mL。把Florisil柱（200mg/3mL）接到C18柱（500mg/6mL）上，使用前用5mL二氯甲烷淋洗，将浓缩的提取液缓缓注入净化柱中，15mL离心管收集留出液，用2×2mL二氯甲烷洗梨形瓶，洗液注入净化柱中。用5mL1.5%甲醇的二氯甲烷淋洗净化柱，洗脱液收集于同一15mL离心管中，氮气浓缩至干，加1mL流动相溶解残渣，0.45μm膜过滤，用于HPLC分析，8种氨基甲酸酯类农药（杀线威、灭多威、涕灭威、抗芽威、残杀威、苯恶威、西维因、仲丁威）的平均回收率为80.9%~94.4%。

陈鹭平等将5.0g茶叶置于250mL顶空瓶中,加入0.3g抗坏血酸,再加入80mL氯化亚锡溶液（溶解15g氯化亚锡于430mL浓盐酸中，用蒸馏水稀释至1000mL），立即封闭瓶口，置于80℃烘箱中加热2h，每隔30min振摇1次，用微量注射器准确吸取顶空瓶内气体100μL注入GC仪进行分析。陈燕清等在50mL鲜牛奶中加入50mL水，调节pH为6~7，再加入20mL乙酸乙酯，超声提取10min，以4000r/min离心10min，将有机相收集于圆底烧瓶中。加入10mL乙酸乙酯于离心管内，按以上操作，重复萃取2次，合并有机相。将有机溶液于40℃减压蒸干。分别用2mL丙酮洗涤圆底烧瓶3次，并依次移入C18小柱（100mg/mL，用前先活化），收集流出液，氮气吹干，用流动相定容1mL用于LC-MS分析，方法的平均回收率杀线威为92.5%~95.6%、涕灭威为91.6%~93.4%。

樊雯娟等采用分散液相微萃取技术，将50mL番茄样品溶液（提前打浆，按1∶1加水混匀，过滤）装在10mL带塞的尖底离心试管中，快速注入22mL丙酮（分散剂2mL）-二氯甲烷（萃取剂200μL）混合溶液，涡旋1min，此时混合溶液形成水-丙酮-二氯甲烷的乳浊液体系，二氯甲烷均匀地分散在水相中，室温放置2min，再以8000r/min离心5min，萃取剂二氯甲烷沉积到试管底部，移走上层液体，吸取下层沉积相100μL置进样瓶内衬管中用于HPLC分析，8种氨基甲酸酯类农药（涕灭威亚砜、灭多威、涕灭威砜、3-羟基克百威、涕灭威、速灭威、克百威和甲萘威）残留的测定，平均加标回收率为79.1%~98.6%。

蒋施等称取蔬菜或食用菌样品20.0g于100mL离心管中，加入丙酮-乙腈（85∶15）混合溶剂40mL，用3.0mol/mL氢氧化钠溶液调pH至9~10，均质提取1min；用少量混合溶剂清洗均质器，并入离心管中，以4000r/min离心5min，上清液转移至分液漏斗，加入50g/L氯化钠溶液50mL，再依次用25mL、20mL、15mL二氯甲烷萃取，萃取液通过装有10g无水硫酸钠的漏斗滤入快速浓缩瓶中，于35℃真空快速浓缩至近干，将残渣用甲醇-二氯甲烷（1∶99）混合溶剂20mL溶解，注入PSASPE柱[3mL/200mL，用前先加入甲醇10mL，再加入甲醇-二氯甲烷（1∶99）混合溶剂10mL，充分活化]，用甲醇-二氯甲烷（1∶99）混合溶剂洗脱，控制洗脱速率约为10mL/min，收集洗脱液7mL于35℃浓缩至近干，残渣用甲醇-水（2∶8）混合溶液1.0mL溶解，过0.2μm膜，供LC-MS/MS仪测定19种氨基甲酸酯类农药残留。

6 检测方法

在氨基甲酸酯类农药残留的检测方法中，目前较为常用的有气相色谱法（GC）、气相色谱质谱法（GC-MS、GC-MS/MS）、液相色谱法（LC）、液相色谱质谱法（LC-MS、LC-MS/MS）和快速检测法；也有一些方法如薄层色谱法、分光光度法、放射免疫法等由于方法或设备的局限曾经有过研究但应用不多；另外，生物传感器和临界流体色谱技术目前仍处在研究阶段，在方法和设备上仍需要进一步完善。

6.1 GC 和 GC MS、GC-MS/MS法

GC是目前用于测定有机磷和氨基甲酸酯类农药残留较为常用的农药残留检测方法。对热较为稳定的氨基甲酸酯类农药可直接采用GC配氮磷检测器（NPD）、氢火焰离子化检测器（FID）、电子捕获检测器（ECD）进行检测。在农药残留检测中，MS检测器有着明显的优势，在GC中，自从MS检测器与GC仪实现联机之后，大大地拓宽了GC法测定氨基甲酸酯类农药的检测范围，使得许多采用传统检测器无法检测的农药能获得较低的检测限。GC-MS由于具备GC的高分离性能和MS的高鉴别性能，具有灵敏度高、抗干扰性强、定性准确可靠的特点。GC-MS/MS又进一步提高仪器的特异性和灵敏度，在氨基甲酸酯类农药残留的检测中有着广阔的应用前景。在方法开发中，速灭威、灭虫威、恶虫威、乙霉威、仲丁威、残杀威、异丙威、甲萘威、抗蚜威、二甲威、丙硫克百威、丁硫克百威、克百威、灭多威、涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜、3-羟基克百威、禾草丹已相继在采用GC技术直接检测氨基甲酸酯类农药残留的相关文献中出现。采用GC与GC-MS（或GC-MS/MS）法检测氨基甲酸酯类农药残留的一些方法条件见表6-6。

典型的GC法测定氨基甲酸酯类农药残留的方法如高生等制定的国家标准（GB/T 19373-2003），采用GC法检测饲料中的速灭威、叶蝉散、仲丁威、虫威、呋喃丹、抗蚜威和西维因7种氨基甲酸酯类农药残留。该方法的原理是以丙酮提取配合饲料或浓缩饲料中氨基甲酸酯类农药，加硫酸钠水溶液，用石油醚提取，经弗罗里硅土柱净化，然后用配有氮磷检测器（NPD）和毛细管柱的气相色谱仪测定。色谱的参考条件如下：色谱柱，HP-5毛细管柱，30m×0.32mm；升温程序，170℃保持1min，以8℃/min的速度升至230℃，保持12min；检测器及温度，NPD，280℃；载气，氮气，纯度≥99.99%，流量，2.0mL/min；氢气，3.0mL/min；空气：80mL/min；尾吹气，20mL/min；进样模式，不分流进样，06min后开阀；进样量，1μL。

6.2 LC和LC-MS、LC-MS/MS法

采用LC分析技术能有效弥补GC法难测高沸点、热不稳定、非挥发性的氨基甲酸酯类农药残留缺陷，由于许多氨基甲酸酯类农药在高温下很不稳定，使得LC谱在其残留检测方面已成为不可缺少的重要方法。LC法的分离技术是基于样品中各组分对固定相（色谱柱）与流动相之间不同的亲和力而建立的，可以在常温或甚至更低的温度就能实现进样和样品分离，对于热不稳定的农药及其残留的分析有其独特优势。

随着科学技术的发展，色谱柱的填料品种及性能不断得到更新，HPLC技术也在不断提高，对于一些结构极其相似的化合物如几何异构体和光学异构体已能实现有效分离。在传统的HPLC分析方法中，紫外-可见光检测器（VWD）和荧光检测器（FLD）是使用较为普遍的检测器，二极管阵列检测器（DAD）是一款能对样品中各组分进行在线光谱全扫描的检测器，可帮助对目标物进行定性。由于部分氨基甲酸酯类农药无紫外或荧光吸收，需要进行柱前或柱后衍生化才能进行检测。示差折光检测器由于不能适用梯度洗脱程序，电化学检测器（ECD）由于仪器维护麻烦，在农药残留检测中较少应用。

近年来，随着HPLC-MS技术在农药残留检测工作中的应用，氨基甲酸酯类农药残留检测的灵敏度和检测范围大大提高，HPLC-MS/MS技术的应用使得农药残留检测的检测限达到ng/g或以下的水平。采用HPLC与HPLC-MS（或HPLC-MS/MS）法检测氨基甲酸酯类农药残留的一些方法条件见表6-7。

典型LC法测定氨基甲酸酯类农药残留的方法如吴莉宇等制订的农业行业标准（NY/T 1679—2009），采用LC-MS/MS法测定植物性食品中氨基甲酸酯类农药残留，取10g样品加40mL乙腈高速均质，离心后上清液用NaCl盐析，有机层分取20mL减压蒸干，用2mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）溶解残渣后过SPE取柱（氨基柱，500mg/6mL，使用前先用4mL甲醇-二氯甲烷预淋洗），再2次用2mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）洗蒸馏瓶后过SPE柱，过柱样液氮气吹干后用2.5mL甲醇溶解，进行HPLC-MS/MS分析。参考的LC、MS条件：色谱柱：ArlantisC18（5μm），2.1mm×150mm，或相当者；洗脱程序见表6-8；进样量10μL；扫描模式：分段多通道扫描（正离子）；MRM，定量和定性离子见表6-9；毛细管电压3.5kV；离子源温度120℃。离子流色谱图见图6-7。

6.3 快速检测法

氨基甲酸酯类农药的作用机制与有机磷农药相同，其基本原理是两类药物均能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的累积，影响正常传导，使昆虫中毒致死。氨基甲酸酯类农药的快速检测常与有机磷农药同时进行，主要利用其对乙酰胆碱酶的抑制特性。周华英等制订的浙江省地方标准（DB33/T 335—2001）利用有机磷类或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的抑制特性，设计合适的底物，使其产生颜色变化。蔬菜样品被剪碎后，用等量的水浸泡10min，将速测卡的试纸端泡入水中10s后取出后翻叠贴紧，白色面朝外，3~5min观察结果。如果蔬菜中有有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，则抑制胆碱酯酶的活性，速测卡不显色；反之，显蓝色。该方法使用极为方便，适合在市场或田间进行即时监测，但番茄、紫包菜、葱蒜类不适合用此方法检测。

高晓辉等制订的农业行业标准（NY/T 448—2001）也是利用有机磷类或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的抑制特性，取适量浸泡过蔬菜样品的缓冲液，加入丁酰胆碱酯酶和显色剂（碘化硫代丁酰胆碱），37~38℃下反应30min，加入底物，用分光光度计测定吸光值随时间的变化值，计算出抑制率，判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留情况。即∶

如以乙酰硫代胆碱为底物，活性正常→样品中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药在乙酰胆碱酯酶的作用下乙酰硫代胆碱水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410nm处有最大吸收峰，用分光光度计可测得酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。抑制率大于70%时，表示蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。