气相色谱与高效液相色谱区别(高效液相色谱法)

Posted 2023-05-30

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气相色谱与高效液相色谱区别(高效液相色谱法)

液相色谱法是一种以液体为流动相的柱色谱分离与分析技术。相对以气体为流动的气相色谱而言，以液体作为流动相的任何一种色谱过程均为液相色谱。由于液相色谱法高效、快速，之后的到了迅速发展，在经典的液相柱色谱法的基础上，吸收了气相色谱法等的理论和实践技术，并采用高压输液泵、高效固定相和高灵敏检测器等装置，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化，这种柱色谱技术成为高效液相色谱法，又成为高压液相色谱法。

高效液相色谱法具有以下突出特点：高压、高速、高效、高灵敏度、应用广泛。

柱外效应：是指色谱柱以外的引起色谱峰变宽的各种因素，如流动相在管壁附近的流速不如在管中心的流速快，就会引起峰的拓宽，尤其使用小内径色谱柱时，柱外效应更明显。色谱峰展宽包括柱前锋展宽和柱后峰展宽。柱前峰展宽主要是由进样和进样器连接管死体积引起的，进样时液流的扰动和连接管的死体积会引起色谱峰的变宽和不对称，所以样品最好直接进到柱头的中心部位。柱后展宽主要是由检测器流通池体积及其连接管等引起的，采用小体积检测器可以降低柱外效应，一般，柱外管道的半径为2~3nm或更小。总之，要减少柱外效应，要尽可能减小柱外死体积，如采用零体积接头来连接各个部件。

高效液相色谱仪

流动相的差异决定了液相色谱仪和气相色谱仪的不同。高效液相色谱仪包括高压输液泵、梯度淋洗装置、进样装置、色谱柱、检测器和记录系统等主要部件。工作流程如下图：储液器中储存的流动相经过高压泵送到色谱柱冲洗柱子，当柱子平衡而且基线平直后，试样通过注射器进入进样器，然后由流动相把试样送到色谱柱进行分离，分离后的组分由检测器检测，输出的信号通过放大器放大后用记录仪记录下来。

高效液相色谱仪工作流程图

1、高压输液泵高压输液泵是用来输送流动相的，它是高效液相色谱仪的重要部件，应具备以下的条件，流量稳定、有较高的输出压力、能抗化学腐蚀、泵的死体积小、操作与维修方便

2、梯度淋洗装置对于某些复杂的样品，采用等度洗脱时往往不能满足要求，采用梯度洗脱，即可在分离过程中，组成流动相的是两种或两种以上的不同的溶剂，按一定程序连续改变配比、极性、PH值和离子强度，从而达到提高分离效果和分析速度的目的。

3、进样装置进样装置的作用是把分析样品有效地送入色谱柱中进行分离。由于高效液相色谱柱子较短，固定相颗粒较细，进入柱中的样品在流动相中扩散越迅速，则色谱法峰越宽，因此，进样时要求样品在到达柱头前，不与流动相混合，直接注射到柱头中心即所谓“点进样”。进样方式通常有：隔膜进样、停留进样、阀进样和自动进样等。

4、色谱柱色谱柱是色谱分离的核心，分离效果的好坏主要决定于色谱柱的性能。通常采用填充柱，即按一定的方法把固定相填入柱中，色谱柱由色谱柱管和填充的固定相组成，固定相色谱分离的关键部分，对色谱柱管的要求是耐高压、耐腐蚀。一般采用厚壁的玻璃管或内径经过抛光（提高色谱柱的分离效果）的不锈钢制成。

5、检测器高效液相色谱对检测器的要求是灵敏度高、重现性好、线性范围宽、噪声低、定量准确、对温度和流量的变化不敏感，衡量检测器性能的一些指标一般仍沿用气相色谱检测器的表示方法。高效液相色谱检测器分为两类：一类是通用型检测器，它对试样和流动相总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光检测器和电导检测器。这类检测器使用范围广，但是由于它对溶剂（流动相）也有响应，因此易受温度、流量变化的影响，造成较大的噪声和漂移，不能用于梯度淋洗，灵敏度较低，不适于衡量分析。另一类是选择性检测器（溶质性检测器），它仅对被分离组分的物理或化学性质有响应，对流动相无影响或响应很小，如紫外吸收检测器和荧光检测器等都属于这一类。