杂质检测(药物中一般杂质的检查)
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杂质检测(药物中一般杂质的检查)
药物中一般杂质的检查
一、氯化物检查法：
原理：药物中微量氯化物在硝酸酸性条件下，与硝酸银反应，生成氯化银白色胶体微粒。
方法：对照法（目视比浊），暗处放置5min(避免AgCl分解)，黑色背景下，自上向下
注意事项：① 平行试验：保证样品管与对照管的反应条件一致② 加稀硝酸的目的（避免弱酸银盐的干扰，也可加速氯化银沉淀的生成）酸度以50ml供试液中含硝酸10ml为宜。③供试品处理：供试品不澄明，用含有硝酸的蒸馏水洗净滤纸中氯化物后过滤；④供试品有色，使用内消色法解决。
二、硫酸盐检查法
原理：药物中微量的硫酸盐在稀盐酸酸性条件下与氯化钡反应，生成硫酸钡白色浑浊。
方法：目视比浊。
注意事项：① 平行试验②盐酸（防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀生成影响比浊），50ml供试品中含2ml稀盐酸。③供试品溶液不易溶解时，加入适量有机溶剂将药物溶解后再依法检查。④供试品有色，使用内消色法解决。
三、铁盐检查法
原理：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐与作用生成红色可溶性硫氰酸铁配离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色
方法：硫氰酸盐法（Chp、USP） BP采用巯基醋酸法
条件：盐酸（防止三价铁离子水解），50ml含稀盐酸4ml为宜
标准溶液：硫酸铁胺，并加入硫酸防止铁盐水解，50ml溶液中含10-50ug三价铁离子
注意事项：①过硫酸铵（氧化二价铁离子成三价铁离子，防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色）②葡萄糖中用硝酸作氧化剂，但须加热煮沸除去过量硝酸。③过量的硫氰酸铵，增加硫氰酸铁配离子稳定性，消除其他酸根离子的干扰④色调不一致或颜色较浅时，须加正丁醇或异戊醇提取比较。
巯基醋酸法（BP）：原理：巯基醋酸还原三价铁离子为二价铁离子，在氨碱性溶液中作用生成红色配位离子，比色测定。（灵敏度高，但试剂贵）
四、重金属检查法
第一法：硫代乙酰胺法，适用于溶于水，稀酸和乙醇的药物。
原理是硫代乙酰胺在弱酸性条件(pH3.5 醋酸盐缓冲液)下水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液。
注意事项：① 标准铅溶液浓度② 硫代乙酰胺试液（H2S试液：恶臭和毒性；不稳定；易被空气氧化而析出硫；浓度难以控制。）
③ 溶液的pH
Ø pH在3.0~3.5时, 呈色较完全；
Ø 酸度增大, 呈色变浅甚至不呈色；
Ø 若经强酸处理，需先加氨水至酚酞显中性，再加醋酸盐缓冲液。
④ 供试品溶液有颜色时的处理a. 外消色法（Ⅰ. 稀焦糖溶液调节Ⅱ. 指示剂调节） b. 内消色法
⑤ 干扰物的排除方法
a. 供试品中微量高价Fe3+存在
干扰：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S析出S，产生混浊影响检查.
排除：加入抗坏血酸或盐酸羟胺使Fe3+还原为Fe2+。
b. 供试品为铁盐（大量的Fe3+）
Fe3+在HCl溶液中能形成配位化合物用乙醚提取Fe3++HCl →[HFeCl6]2-（黄色）
水层加氨试液调至碱性,残存的Fe3+可用KCN掩蔽, 按第三法检查.
第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法，适用于含芳环，杂环及难溶于水，稀酸及乙醇的有机药物。
原理：供试品先炽灼破坏后,使有机结合的重金属游离, 再按第一法检查.
注意事项：a. HNO3处理后,必须蒸干除尽NO. b. 炽灼温度严格控制：500-600℃ c. 控制酸中重金属的影响，对照品同法处理 d. 含钠盐或氟的有机药物在炽灼时改用铂坩埚或硬质玻璃 (玛瑙) 蒸发皿.
第三法：硫化钠法，适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。
原理：在碱性介质中,以Na2S为显色剂, 使Pb2+与S2-作用生成PbS 的混悬液, 与一定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比较, 不得更深.
注意事项：Na2S 对玻璃有腐蚀性,久置产生絮状物,应临用新配.
第四法：微孔滤膜法，适用于重金属限量低的药物。
五、砷盐检查法
(1)古蔡氏法：原理金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑；
试剂的作用：
a. KI的作用——还原剂：As5+→As3+ ，以增大AsH3的生成速度.
b. 酸性SnCl2的作用：①还原剂(表现在2方面)Ⅰ. 将五价砷还原为三价砷(As5+→As3+)Ⅱ. 将KI被氧化生成的I2再还原为I-；SnCl2与KI还可抑制锑化氢生成
c.PbAc2棉花的作用——排除硫化物的干扰(1mg S2- )
干扰物的排除：
a. 供试品是硫化物,亚硫酸盐,硫代硫酸盐。排除方法：加入浓硝酸处理
b. 供试品是铁盐(Fe3+)Fe3+能消耗还原剂(KI、SnCl2), 并能氧化砷化氢.
排除方法：先加酸性SnCl2试液使Fe3+ → Fe2+
c. 共价键结合的砷化物 排除方法：进行有机破坏——酸破坏法或碱破坏法
(2)白田道夫法
原理：SnCl2在HCl中能将砷盐还原为棕褐色的胶态砷,
适用：对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法,需用白田道夫法.不受锑干扰弹灵敏度低。
(3)二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag（DDC）法）
本法不仅用于砷盐的限量检查, 而且可用作微量砷盐的含量测定.
(4)次磷酸法
原理 在盐酸酸性溶液中, 次磷酸还原砷盐为棕色的游离砷
特点：用于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物等砷盐检查；不受S2-,SO32-,Sb干扰
六、干燥失重测定法
干燥失重（loss on drying）主要检查药物中的水分及其他挥发性物质。指药品在规定的条件下, 经干燥后所减失的量,以百分率表示。恒重：连续两次干燥或炽灼后称重差异在0.3mg以下。
（一）常压恒温干燥法：适用于受热稳定的药物
方法：通常将样品置于相同条件下已干燥至恒重的扁形称量瓶中，再干燥箱中按规定的温度（105）恒温加热将样品干燥至恒重。
注意事项：1）平铺厚度，﹤5 mm；疏松物质， ﹤10 mm
2）干燥时，瓶盖置于称量瓶旁，取出前盖上
3）含较多结晶水，在相对高温条件下，先除去部分水分
4）含大量其他水分且熔点低，先在低温除去大量水分，或先减压干燥再恒温干燥；
5）不易恒重药物，一定温度和时间减少重量判断
6）供试品为膏状物，取洗净粗砂粒和小玻棒干燥至恒重后用于搅匀和干燥
（二）减压干燥法与恒温减压干燥法：适于熔点低、受热分解的供试品。
1）采用减压干燥器（通常为室温）；或恒温减压干燥器（温度按各品种项下的规定设置）
2）干燥剂：无水氯化钙、硅胶、或五氧化二磷，有时不用干燥剂。恒温减压干燥器中常用五氧化二磷。
（三）干燥剂干燥法：适用于受热易分解或易升华的供试品。
1）置于干燥器中，利用干燥剂吸收水分，干燥至恒重；
2）干燥能力：五氧化二磷 > 硅胶 > 硫酸
注意事项：
1）使用五氧化二磷是需将干燥剂铺于培养皿中，置干燥器内；
2）表层结块或出现液滴，应将表层刮去，加入新的再使用；弃去的五氧化二磷不可倒入下水道，应埋入土中，不重复使用；
3）硫酸放于培养皿或烧杯中，可重复使用，将含水硫酸置于烧杯中加热冒白烟，在110oC约30min。
（四）热分析法（热重分析TGA、差热分析DTA、差示扫描量热法DSC）
七、水分测定法
水分包括结合水和吸附水。药典收载费休氏法和甲苯法。
费休氏法可准确测定药物中的结晶水、吸附水和游离水。
原理：碘将二氧化硫氧化为三氧化硫时，需要一定量的水分参与反应，根据消耗碘的量来测定水分的含量。
水与费休氏试液摩尔比：水：碘：二氧化硫：甲醇：吡啶=1：1：1：1：3
指示终点方法：①Fisher试液颜色：淡黄色——红棕色②永停法
八、炽灼残渣检查法
炽灼残渣（residue on ignition）：有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，再经高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。用于控制有机药物经炭化或挥发性无机药物中非挥发性无机杂质。
注意事项：
1）放入高温炉内之前，务必蒸发除尽硫酸，以免腐蚀炉膛；
2）除尽硫酸蒸气，应低温加热，以防由于温度过高，影响测定结果；
3）含氟样品采用铂坩埚；
4）炽灼残渣留作重金属检查是，温度控制在500-600oC；恒重的第二次称重在继续炽灼30min后进行。
九、易碳化物检查
易炭化物（readily carbonizable substances）：指药物中存在遇硫酸易炭化或氧化而呈色的微量有机物质。多为未知结构的化合物，用硫酸呈色的方法控制他们的含量。目视比色法。
十、残留溶剂测定法（检查方法：气相色谱法）
残留溶剂（residual solvents）：合成原料药、辅料或制剂生产过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。毒性程度分四类：避免使用、限制使用、推荐使用、其他溶剂。前3类按规定限量使用，第4类根据生产工艺制定限度 P129。
（一）色谱系统与系统适应性试验(System Suitability Tests; SSTs)
以直径为0.25-0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为80-170℃；并符合下列条件：⑴用待测物的色谱峰计算的N应大于1000；⑵内标物与待测物的两个色谱峰的R≥1.5；⑶每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD≤5%；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD≤10%
（二）测定方法
十一、溶液颜色检查法
溶液颜色（color of solution）检查药物中有色杂质， ChP采取三种检查方法（附录收载） （P134）：
① 标准比色液比色法；② 分光光度法；③ 色差计法（可测大固体液体；定量；目视法难以判断时使用）
十二、溶液澄清度检查法
澄清度（clarity of solution）检查药品溶液的混浊程度，可反应药物溶液中的微量不溶性杂质，主要用于制备注射剂的原料药或注射剂检查。ChP中澄清度的检查法为比浊法。
第四章 药物的含量测定方法与验证
1、药物的含量：药物所含主成分的量，用于评价药物的质量。
2、药典对药物的含量限度的表示方法：
原料药：多以%表示
①按原料药本身形式计算其含量：凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量上限不得超过101.0%。
②由于药物组成不定，需以另一种稳定形式计算含量
制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情况
①按标示量计算②直接用%含量规定范围（主药含量微）③以重量规定含量范围（多为复方制剂）
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