机器提取DNA(人类基因组DNA提取)

Posted 2023-05-29

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机器提取DNA(人类基因组DNA提取)

一、人类基因组DNA提取实验简介：

人类基因组DNA提取实验中所用细胞裂解液裂解细胞膜，收集细胞核，添加SDS破坏核膜，使用蛋白酶K将核蛋白降解为小片段，然后从DNA上解离，通过苯酚-氯仿提取去除蛋白质，然后用无水乙醇，75。用％乙醇洗涤DNA沉淀物，真空干燥，并溶解在TE中以获得高分子量DNA。

二、人类基因组DNA提取实验所需试剂：

1.5ml Ep离心管,蛋白酶K溶液,NaAc,1000ul蓝吸头

三,人类基因组DNA提取实验步骤：
1.细胞分裂和RNase /蛋白酶K消化
①将100微升抗凝全血放入1.5ml Ep离心管中，然后加入100微升裂解物和20微升RNaseA /蛋白酶K溶液，来回吸打混合，并在55°C孵育35min将离心管倒置来回几次直到溶液是水溶性的。
②加入10微升的3M NaAc（pH 4.8），然后加入1250微升的结合缓冲液，充分摇匀以在12,000 rpm下离心30秒。
2. DNA与吸附柱结合
用移液管转移上清液，并将其加入离心吸附柱（设置收集管）中，静置1min以离心12,000 rpm30秒，然后将废液丢弃在收集管中。注意：待转移的上清液约为1300微升，而离心吸附柱的容量约为650微升，因此每次需要将650微升的上清液转移至离心吸附柱，进行离心处理，将废液丢弃在收集管中，然后重复实验操作步骤3。
3. DNA的纯化
①在离心吸附柱（设置收集管）中加入600微升洗涤缓冲液（洗涤缓冲液），以离心12,000 rpm30秒。
②重复步骤4一次，以离心12,000 rpm3分钟以完全除去洗涤缓冲液。
③小心取出离心吸附柱，弃去收集管，将离心吸附柱放入干净的1.5ml Ep离心管中，向离心吸附柱添加50微升分离缓冲液（洗脱缓冲液）（代替缓冲液，必须添加在离心吸附柱的中央）静置1min,以离心12,000 rpm30秒。
④取出装有提取的基因组DNA的Eppendorf离心管。
4. DNA的琼脂糖凝胶电泳
取8-10微升基因组DNA，加入2微升上样缓冲液，充分混合，将样品加入1％琼脂糖凝胶斑点中，然后进行电泳。