昆山数控型超声波清洗器(「营养检测」一种比“国标”便捷的维生素C检测实例)

实验说明

实验内容：来自“力邦营养科技检测实验室”，本文详细介绍了特殊膳食的“维生素C”检测操作流程，着重讲解了实际操作中的问题及解决方案，供同行交流学习。

实验项目：特殊医学用途配方食品的“维生素C”测定。

实验标本：立适康营养粉（纤维型）

实验方法：属实验室自建方法，欢迎交流。

检测原理

●试样先经2%偏磷酸水溶液沉淀蛋白质等大分子组分，试样维生素C经偏磷酸溶液提取后，在高效液相色谱仪上C18色谱柱分离，紫外检测波长242nm检测，外标法定量检测维生素C的含量。

仪器器材

1. 高效液相色谱仪，带紫外检测器。（安捷伦1260系列）

2. 精密天平：感量为 0.1 mg。（赛多利斯科学仪器有限公司 ）

3. 高速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司 HC-2518 ）

4. 电热恒温水浴锅：60 ℃±2 ℃。（北京科伟永兴仪器有限公司 ）

5. 数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司 KQ3200DE ）

6. 涡旋震荡器 （海门其林贝尔仪器制造有限公司 QL866 ）

试剂与试样

●磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钾溶液1.77g用去离子水定容至1L，用 磷酸调节pH至2.5。

●2%偏磷酸溶液：20g偏磷酸加入1L去离子水，电炉上加热溶解。

●维生素C对照品（中国药品生物制品检验所），规格：50mg

●甲醇：色谱纯

●待测样：立适康营养粉（纤维型）

试样处理

1. 准确称量3g待测试样，用2%偏磷酸溶液定容至100ml容量瓶中，涡旋震荡器充分震荡后，静置30min。

2. 离心：12000 转/分离心6分钟，

3. 取上清液用0.22μm针孔过滤器过滤，作为供试液。

高效液相分析色谱条件-VC的设定

●色谱柱：C 18 柱，250 mm ×4.6 mm，5 μm，

●流动相：磷酸盐缓冲液：甲醇=98:2

●流速：1.0 mL/min。

●检测波长：维生素E：242 nm。

●柱温：35 ℃±1 ℃。

●进样量：5μL。

维生素C标准品和立适康营养粉（纤维型）色谱图1

维生素C标准品和立适康营养粉（纤维型）色谱图2

方法学考察实验

1. 线性关系考察，用2%偏磷酸溶液配制成2μg/ml，5μg/ml，10μg/ml， 20μg/ml，30μg/ml，50μg/ml，100μg/ml，250μg/ml，500μg/ml。

2. 精密度实验，精密吸取供试品溶液，连续进样5次，测定维生素C峰面积。结果维生素C峰面积的RSD为0.21%。

3. 加标回收实验，称取已知含量的立适康营养粉（每100g含38mg），称取6份，每份3g，精密称定，每三份精密加入维生素C 40mg和80mg，根据此法检测，计算回收率。

实验总结

1. 维生素C 极不稳定，在酸性环境中稳定性较好，采用2%偏磷酸溶液，既可以沉淀待测样中的蛋白质类大分子组分，又可以提取样品中的维生素C，方法学考察结果较好。

2. 维生素C 检测中，样品及配置的标准溶液应尽量避光保存，预防维生素C的氧化，减少检测误差。

3. 检测时，采用磷酸盐缓冲溶液体系进行HPLC分析，有较好的分离效果，可以较好的分离出维生素C组分。

4. 相比于GB 5413.18-2010《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》，国标方法样品前处理步骤较为繁琐，时间耗费较长，本方法前处理过程较为简单，采用HPLC体系快速分析检测，为维生素C的检测提供一种参考方法。