微生物检验的指标有哪些(GB 47892-2022 英文版食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数)

Posted 2023-05-26

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微生物检验的指标有哪些(GB 47892-2022 英文版食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数)

GB 4789.2-2022 英文版食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定

１　范围
本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数的测定。
２　术语和定义
３　设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
ａ）　恒温培养箱：３６℃±１℃，３０℃±１℃。
ｂ）　冰箱：２℃～５℃。
ｃ）　恒温装置：４８℃±２℃。
ｄ）　天平：感量为０．１ｇ。
ｅ）　均质器。
ｆ）　振荡器。
ｇ）　无菌吸管：１ｍＬ（具０．０１ｍＬ刻度）、１０ｍＬ（具０．１ｍＬ刻度）或微量移液器及吸头。
ｈ）　无菌锥形瓶：容量２５０ｍＬ、５００ｍＬ。
ｉ）无菌培养皿：直径９０ｍｍ。
ｊ）　ｐＨ计或ｐＨ比色管或精密ｐＨ试纸。
ｋ）　放大镜或／和菌落计数器。
４　培养基和试剂
４．１　平板计数琼脂培养基：见Ａ．１。
４．２　菌落总数测试片：应符合GB ４７８９．２８中平板计数琼脂培养基质量控制要求，且主要营养成分与平板计数琼脂培养基配方一致。
４．３　无菌磷酸盐缓冲液：见Ａ．２。
４．４　无菌生理盐水：见Ａ．３。
５　检验程序
菌落总数的检验程序见图１。
６　操作步骤
６．１　样品的稀释
６．１．１　固体和半固体样品：称取２５ｇ样品置于盛有２２５ｍＬ无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内，８０００ｒ／ｍｉｎ～１００００ｒ／ｍｉｎ均质１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，或放入盛有２２５ｍＬ稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，制成１∶１０的样品匀液。
６．１．２　液体样品：以无菌吸管吸取２５ｍＬ样品置于盛有２２５ｍＬ无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，或放入盛有２２５ｍＬ稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，制成１∶１０的样品匀液。当结果要求为每ｇ样品中菌落总数时，按６．１．１操作。
６．１．３　用１ｍＬ无菌吸管或微量移液器吸取１∶１０样品匀液１ｍＬ，沿管壁缓慢注于盛有９ｍＬ稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），在振荡器上振荡混匀，制成１∶１００的样品匀液。
６．１．４　按６．１．３操作，制备１０倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用１次１ｍＬ无菌吸管或吸头。
６．１．５　根据对样品污染状况的估计，选择１个～３个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），吸取１ｍＬ样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。同时，分别吸取１ｍＬ空白稀释液加入两个无菌培养皿内作空白对照。
６．１．６　及时将１５ｍＬ～２０ｍＬ冷却至４６℃～５０℃的平板计数琼脂培养基（可放置于４８℃±２℃恒温装置中保温）倾注培养皿，并转动培养皿使其混合均匀。
６．２　培养
６．２．１　水平放置待琼脂凝固后，将平板翻转，３６℃±１℃培养４８ｈ±２ｈ。水产品３０℃±１℃培养７２ｈ±３ｈ。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面蔓延生长的菌落，可在凝固后的琼脂培养基表面覆盖一薄层平板计数琼脂培养基（约４ｍＬ），凝固后翻转平板，进行培养。
６．２．２　如使用菌落总数测试片，应按照测试片所提供的相关技术规程操作。
６．３　菌落计数
６．３．１　可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位表示。
６．３．２　选取菌落数在３０ＣＦＵ～３００ＣＦＵ之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于３０ＣＦＵ的平板记录具体菌落数，大于３００ＣＦＵ的可记录为多不可计。
６．３．３　其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无较大片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，可计算半个平板后乘以２，代表一个平板菌落数。
６．３．４　当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
７　结果与报告
７．１　菌落总数的计算方法
７．１．１　若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每ｇ（ｍＬ）样品中菌落总数结果，示例见Ｂ．１。
７．１．２　若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（１）计算，示例见Ｂ．２。
７．１．３　若所有稀释度的平板上菌落数均大于３００ＣＦＵ，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算，示例见Ｂ．３。
７．１．４　若所有稀释度的平板菌落数均小于３０ＣＦＵ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算，示例见Ｂ．４。
７．１．５　若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于１乘以最低稀释倍数计算，示例见Ｂ．５。
７．１．６　若所有稀释度的平板菌落数均不在３０ＣＦＵ～３００ＣＦＵ之间，其中一部分小于３０ＣＦＵ或大于３００ＣＦＵ时，则以最接近３０ＣＦＵ或３００ＣＦＵ的平均菌落数乘以稀释倍数计算，示例见Ｂ．６。
７．２　菌落总数的报告
７．２．１　菌落总数小于１００ＣＦＵ时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
７．２．２　菌落总数大于或等于１００ＣＦＵ时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字，后面用０代替位数；也可用１０的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
７．２．３　若空白对照上有菌落生长，则此次检验结果无效。
７．２．４　称重取样以ＣＦＵ／ｇ为单位报告，体积取样以ＣＦＵ／ｍＬ为单位报告。
附　录　A
培养基和试剂
A．１．１　成分
A．１．２　制法
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节ｐＨ至７．０±０．２。分装于适宜容器，１２１℃高压灭菌１５ｍｉｎ。
A．２　无菌磷酸盐缓冲液
A．２．１　成分
A．２．２　制法
贮存液：称取３４．０ｇ的磷酸二氢钾溶于５００ｍＬ蒸馏水中，用大约１７５ｍＬ的１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液调节ｐＨ至７．２，用蒸馏水稀释至１０００ｍＬ后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液１．２５ｍＬ，用蒸馏水稀释至１０００ｍＬ，分装于适宜容器中，１２１ ℃高压灭菌１５ｍｉｎ。
A．３　无菌生理盐水
A．３．１　成分
A．３．２　制法
称取８．５ｇ氯化钠溶于１０００ｍＬ蒸馏水中，１２１℃高压灭菌１５ｍｉｎ。

微生物检验的指标有哪些(GB 47892-2022 英文版 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数)

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GB 4789.2-2022 英文版 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定

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