异硫氰酸胍提取DNA(新冠疫情下病毒采样管的学习手册)

Posted 2023-05-25

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异硫氰酸胍提取DNA(新冠疫情下病毒采样管的学习手册)

核酸检测（PT-qPCR荧光法）是当前检测新型冠状病毒肺炎（Corona Virus Disease 2019，COVID-19），简称“新冠肺炎” 的主要方法，试剂盒对于新冠肺炎的诊断、整个疫情防控起到至关重要的作用。核酸诊断检测，首先要进行样本采集，病毒采样管是检测流程中最重要的环节之一。病毒采样管的及时供应，也是疫情防控的重要保障。那么什么是病毒采样管？病毒采样管是怎样的结构，又有哪些试剂成分？

下面我们来了解一下：新冠疫情下病毒采样管为何物？采样管核心原料知多少？

1、什么是病毒采集管？有哪些用途？

病毒采样管用于疾控部门、临床部门对传染病原微生物监测采样使用。适用于流感病毒（普通流感、高致病性禽流感、甲型H1N1流感病毒等）、手足口病毒及其他类型的病毒包括新型冠状病毒的采样及运输。同时也用于支原体、衣原体、脲原体等。2-8℃短时间保存与运输以及-80℃冰箱或液氮环境中的长时间保存。

常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等，病毒采样管就是采样时使用的无RNA酶的储存管，用于从采样现场到检测实验室运送鼻咽拭子标本或特定部位的组织标本，以待进行PCR提取与检测。

2、病毒采集管的构成和主要成分有哪些？

病毒采样管由拭子+采样管+病毒保存液三部分构成。

病毒保存液包括Hank's液基础、庆大霉素、真菌抗生素、BSA (V)、冷冻保护剂、生物缓冲剂和氨基酸。在Hank's基础之上，添加 4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）、BSA（牛血清白蛋白第五组分）等病毒稳定成分，可在较宽的温度范围内维持病毒的活性，降低病毒分解速度，提升病毒分离的阳性率。

另一种以核酸提取裂解液为基础配制的保存液，主要成分为平衡盐类、EDTA螯合剂、胍盐(如异硫氰酸胍、盐酸胍等)、阴离子表面活性剂(如十二烷基硫酸钠)、阳离子表面活性剂(如十四烷基三甲基草酸铵)、苯酚、8-羟基喹啉、二硫苏糖醇(DTT)、蛋白酶K等几种或多种组分，这种保存液是直接裂解病毒释放核酸，消除核酸分解酶(RNase)，如果仅用于RT-PCR较为合适，但裂解液可以灭活病毒，这种样本不能用于病毒的培养分离。

病毒保存液使用的金属离子螯合剂推荐使用EDTA盐类(如乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸二钠等)，不推荐使用肝素类(如肝素钠、肝素锂)，以免影响PCR检测。

病毒保存液的质量，是提高PCR检测阳性率与病毒分离阳性率的关键因素，从根本上决定了病毒采样管的质量。添加常温稳定的真菌类抗生素，可解决采样后的霉菌污染问题，实现采样液的常温保存。