聚丙烯酰胺凝胶法浓缩标本检测HBsAg的结果分析

Posted 2023-01-13 样本

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医疗机构的医疗器械、工作台面常会受到血液的污染，若消毒处理不当则极易造成疾病的医源性传播。加强对消毒后医疗器械、工作台面的HBsAg监测是控制其造成医源性传播的措施之一。因消毒处理后的器械、台面即使有HBV的污染，其HBsAg的量也会极低，加之采样液的稀释，可能使采样液中的HBsAg量远低于ELISA法的检测灵敏度，从而出现假阴性结果。本次模拟现场实验样本，用聚丙烯酰胺凝胶浓缩后检测HBsAg，取得了满意结果，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 聚丙烯酰胺凝胶(浓缩剂)制备 24%单体母液(丙烯酰胺22.8g、双甲掌丙烯酰胺1.2g加水100ml搅拌溶解)15ml加0.02MTris缓冲液(NaCl1.17g、Tris0.24g、EDTA-Na20.07g加水100ml搅拌溶解)15ml，然后加10%TEMED液125μl充分混匀后加入10%过硫酸铵液(须新鲜配制)375μl，迅速混匀后倒入干净的搪瓷盘内，约30分钟聚合凝固。用刀片切成0.5×1cm小块，置去离子水中漂洗数次，放37℃温箱自然干燥成聚丙烯酰胺凝胶颗粒。密闭避光保存备用。
1.2 模拟现场实验样本制备将HBsAg阳性血清用0.03MPBS作1∶4倍比稀释，制成不同浓度的样本液后分别均匀涂布实验台面，待其自然干燥后，用浸有生理盐水的棉?a href='http://www.baiven.com/baike/222/322827.html' target='_blank' style='color:#136ec2'>米油磕ㄉ鲜鍪笛樘?00cm2，投入含4ml生理盐水的试管中。在涡旋混匀器上震荡30秒，以充分洗下吸附在棉拭子上的HB sAg。弃棉拭子后平均分装两管，制成双份平行样，每份2ml。共制备120份双份平行样本。
1.3 模拟现场实验样本浓缩取双份平行样中的一份放入聚丙烯酰胺凝胶颗粒，待凝胶颗粒充分吸收样本中水分后冷藏备检，此样本为浓缩样本。双份平行样中的另一份为未浓缩样本。
1.4 HBsAg检测用ELISA法同时检测浓缩样本及未浓缩样本。检测试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供，效期内使用，严格按试剂使用说明书操作、判读结果。
2 结果
2.1 浓缩和未浓缩样本HBsAg阳性率比较 120份未浓缩样本检出HBsAg阳性14份，阳性率11.7%，120份浓缩样本检出阳性38份，阳性率31.7%，两者间有显著性差异(P<0.01)。
2.2 阳性样本检测结果平均OD值比较浓缩样本、未浓缩样本HBsAg均阳性的14份样本，检测结果用Reader230s酶标仪读取OD值，分别计算平均OD值。未浓缩样本平均OD值为0.232，浓缩样本为0.975，两者间有显著性差异(P<0 01)。
3 讨论实验结果表明，聚丙烯酰胺凝胶浓缩样本不仅可以提高HBsAg检出阳性率，而且可以提高HBsAg阳性样本检测结果的OD值，更加有利于实验结果的判断。该法适用于因受采样液稀释从而导致HB sAg含量降低的样本检测，如医疗机构工作台面、医疗器械采样液HBsAg的监测。ELISA法检测HBsAg虽然具有灵敏度高、特异性强的优点，但其灵敏度亦有一定限制，如国产试剂的灵敏度一般为1.0～3.2ng/ml。而0.1ng/ml的HBsAg即具有传染性，用常规ELISA法检测医疗机构相关样本的HBsAg有漏检传染性样本的可能。用聚丙烯酰胺凝胶法浓缩样本后检测HB sAg可以减少这种可能的发生，对控制疾病的医源性传播具有一定的流行病学意义。聚丙烯酰胺凝胶浓缩样本时仅吸收样品中的水分，对样本中的抗原、抗体无吸附、破坏作用。故认为本法除可用于HBsAg的浓缩检测外，尚可用于其他抗原、抗体(如尿液中HIV-Ab)的浓缩检测。