6种天然药物对乳酸杆菌体外抑菌作用的研究
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【摘要】 目的 研究6种天然药物对乳酸杆菌体外的抑菌作用。方法 以乳酸杆菌作为实验菌株，测定五倍子、大黄、黄连、黄芩、三七和川芎6种天然药物的最小抑菌浓度（MIC）。结果 大黄MIC为4.0mg/ml，五倍子和黄连均为8.0mg/ml。而黄芩、川芎和三七对乳酸杆菌的生长无明显的抑制作用。结论 五倍子、黄连和大黄对乳酸杆菌的生长均有抑制作用，而川芎、黄芩和三七对乳酸杆菌无明显的抑制作用。
【关键词】 天然药物；乳酸杆菌；抑菌作用
乳酸杆菌（Lactobacillus）是口腔正常菌群的主要成员之一。由于它在牙本质龋中的大量存在，决定了它在龋病发展中的地位。口腔是一个复杂的生态环境，正常菌群在口腔的生长和繁殖，对宿主起到有益与破坏的双重作用。因此，单纯杀灭口腔中某种细菌，对破坏口腔内的微环境会带来不利影响。本研究选用6种可能具有调理作用的天然药物，包括五倍子、大黄、黄连、黄芩、川芎和三七，研究其对乳酸杆菌体外抑菌作用，为防治龋病，选择调理口腔正常菌群的生态平衡的药物提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验菌株及菌液制备 乳酸杆菌（Lactobacillus）菌株由广东医学院微生物学教研室提供。 将复苏48h的乳酸杆菌接种于TPY液体培养基中，37°C厌氧培养18h，将培养液置于3000r/min离心15min，收集细菌，应用麦氏比浊标准，调整细菌浓度为108CFU/ml。
1.2 中药粗提物制备 中药五倍子、大黄、黄连、黄芩、川芎和三七均购自湛江天马大药房。将上述中药分别放入红外线快速干燥器中，干燥15min后，碾成粗粉，然后放入电脑干燥箱中，120°C 30min灭菌备用。采用水粗提法，撮五倍子、大黄、黄连、黄芩、川芎和三七的有效成分。水粗提法：用上述干燥的中药粉末50g，加500ml蒸馏水，在2000W电炉上加热至沸腾，保持微沸1h，乘热过滤，在80°C以下减压浓缩至50ml。放入干燥洁净的玻璃密器中，4°C密封保存。
1.3 6种中药粗提物对乳酸杆菌的最小抑菌浓度（MIC）测定 将上述6种药物的粗提物按倍比稀释法溶于TPY琼脂培养基中，使其终浓度达到16.00mg/ml、8.00 mg/ml、4.00 mg/ml、2.00 mg/ml、1.00 mg/ml、0.50 mg/ml、0.25 mg/ml、0.125 mg/ml分别接种乳酸杆菌（108CFU/ml）0.1ml，于37°C厌氧培养48h。 以无细菌生长的最低药物浓度为其MIC值。
2 结果
在6种中药粗提物对乳酸杆菌最小抑菌浓度的测定试验中，发现大黄在4.0mg/ml浓度下即表现明显的抑菌作用，五倍子和黄连在8.0mg/ml时也表现出抑菌作用。而川芎、黄芩和三七则对乳酸杆菌的生长无明显的抑制作用。
3 讨论
现代龋病病因学研究认为，龋病本质上是菌群生态失调性疾病。牙菌斑是龋病发生的启动因子。当牙菌斑内致龋比例异常增高，而益生菌比例异常减少时，使牙菌斑由体致龋性菌斑向致龋性菌斑转化。乳酸杆菌被认为是重要的致龋菌。近年来许多学者从大量化学和生物制剂中寻求有效的抗菌斑药物，国内外学者从天然药物中分离抗龋药物，并已初获成效。已发现了茶中以鞣酸为主的酚类化合物，可以抑制变形链球菌的生长［1］，从而有利于龋菌的防治。Iwamoto等［2］发现了来自槟榔的5′-核苷酸酶抑制剂可抑制变形链球菌生长与产酸，具有防龋病的作用。熊炎斌［3］的研究发现中药大黄、五倍子等均能抑制变形链球菌的生长，其浓度与抑制效果呈正相关。
本实验选用6种中药的相提物进行研究，以了解其对乳酸杆菌生长的影响，实验结果证实：不同的天然药物对乳酸杆菌的生长影响不同，其中大黄、五倍子、黄连对乳酸杆菌的生长有一定的抑制作用。抑制作用最强为大黄，其次为五倍子和黄连。其余药物对乳酸杆菌的生长没有明显的影响。
中药有着错综复杂的成分，对于其抗龋有效成分的确定，一直是研究的难点。以往的研究已发现，茶多酚中的鞣酸，具有收敛、抗菌作用，是主要抗龋成分，已证明其可降低牙菌斑的聚集［4］。本研究中所作中药五倍子、大黄等对乳酸杆菌的抑制作用也可能与鞣质的存在相关。本实验结果提示：五倍子、大黄和黄连可以抑制乳酸杆菌的生长，在龋病的防治及开发利用方面将具有广阔前景。
【参考文献】
1 Otake S，Madimura M，Kuroki T，et al. Anticaries effect of polyhenolic compounds from Japanese green tea. Caries Res，1991，25:438-443.
2 Iwamoto M，Uchino K，Toukairin T，et al. The growth inhibition of siteptococcus mutans by 5’-nucleotidase inhibitors fiom Aceca Catechu L.Chem Pharm Bull，1991，39（5）:1323-1328.
3 熊炎斌，李德玲，刘持平，等.几种植物药对变形链球菌生长、产酸，粘附影响的体外实验.中华口腔医学杂志，1997，32（5）:261.
4 Kashket S，Paolino VJ，Leiwis D，et al.Geucosy tians ferase inhibition by tannin-like Consti tuents of beverages .J Dent Res.1985，64（11）: 212-216.
2 广东湛江，湛江中医学校口腔教研组
3 湖南怀化，怀化新晃妇幼保健医院口腔科
相关参考
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