正交法优化三七提取工艺的研究

Posted 2022-11-25 皂苷

篇首语：别裁伪体亲风雅，转益多师是汝师。本文由小常识网(cha138.com)小编为大家整理，主要介绍了正交法优化三七提取工艺的研究相关的知识，希望对你有一定的参考价值。

【摘要】目的优选三七的最佳提取工艺。方法以三七皂苷R1和人参皂苷Rg1为指标进行正交试验，采用胶束毛细管电色谱法测定含量，优化影响三七提取工艺的条件。结果 4倍量70%乙醇回流提取2次，每次1.5h，乙醚、正丁醇统一处理所得提取液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1的含量最高。结论试验结果可为三七提取工艺的确定提供实验依据，该优化工艺可为工业生产提供参考。

【关键词】三七；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；胶束毛细管电色谱

　　Study on process for extraction of Panax notoginseng by orthogonal experiments

MIAO Wen-li，GUAN Peng，ZHAO Xin-feng，et al.

Science School of Xi’an Jiao Tong University，Xi’an 710061，China

【Abstract】 Objective To optimize the conditions for the extraction of Panax notoginseng.Methods Conditions for the extraction were studied by orthogonal experimental design as guided by the content of notoginsenoside R1 and ginsenosides Rg1 present in the extract.Results The optimum condition for the extraction of P.notoginseng was to circumfuse the herb in 70% alcohol for 1.5h twice，then collect an amount corresponding to 4 times of the quantity of P.notoginseng. The most content of ginsenosides Rg1 and notoginsenoside R1 in Panax notoginseng was determinate by MEKC after the collection was treated with ether and n-butanol.Conclusion The experimental results can be used for confirming process for extraction of Panax notoginseng and offering references for it’s industrial production.

【Key words】 panax notoginseng； notoginsenoside R1； ginsenoside Rg1； capillary electrophoresis

中药三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根，皂苷类是其主要药效成分。文献报道三七总皂苷含量约为12%［1］。胶束毛细管电色谱法（HPCE）以其高效、快速、微量的优势在药物分析中得到广泛应用［2，3］，本文采用三七皂苷R1、人参皂苷Rg1两个指标成分通过正交试验确定三七的最佳提取工艺。

1 仪器与药品

1.1 仪器

HP3DCE毛细管电泳仪（Agilent科技有限公司）；未涂层石英毛细管柱（内径50μｍ，有效长度41.5cm，河北永年光导纤维厂）；pH计（美国梅特勒公司）；超纯水机（基因公司Maxima）。

1.2 药材

三七药材（市售，经西安交通大学生药教研室郭增军老师鉴定为真品）；三七皂苷R1（中国药品生物制品鉴定所，批号：745-8801）；人参皂苷Rg1（中国药品生物制品鉴定所，批号：0703-200119）；乙腈（美国Fisher公司，色谱纯）；超纯水（自制）；其他药品均为分析纯。

2 方法及结果

2.1 毛细管电泳条件

以pH为9.0，20.0mmol/L的硼砂-硼酸缓冲体系加25mmol/L的SDS与乙腈4∶1（V/V）为电泳缓冲溶液，以未涂层石英毛细管柱（内径50μｍ，有效长度41.5cm）为分离通道，压力进样（50mbar×10s），分离电压20kV（25℃），检测波长202nm，所有溶液在使用之前均用聚乙烯滤膜（0.45μｍ）过滤，并超声除去细小气泡，每次电泳分离前，毛细管柱先用0.1mol/L NaOH、超纯水和电泳介质依次分别冲洗3.0、3.0、5.0min，然后进行分离和测定。

2.2 对照品、内标及供试品溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的配制

精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1对照品4.4900mg和4.0212mg，50％甲醇定容于2ml容量瓶中，制备成2.2450mg/ml、2.0106mg/ml的对照品溶液，4℃储藏待用。

2.2.2 内标溶液的配制

精密称取3.0105mg淫羊藿苷，50％的甲醇定容于10ml容量瓶中，制备成0.3010mg/ml的内标溶液，4℃储藏待用。

2.2.3 供试品溶液的配制

收集提取液，用乙醚和水饱和的正丁醇各萃取3次，回收正丁醇，残渣用50%的甲醇溶解并定容于10ml容量瓶中，4℃储藏待用。

2.3 试验方法

2.3.1 提取方法

选择乙醇为溶媒，用热回流法对三七总皂苷进行提取，考察对提取效率影响较大的4项因素：溶剂浓度、溶剂用量、回流次数、回流时间，每个因素各取三个水平。采用L9（34）正交表进行试验，以提取液中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1为考察指标，选择最佳提取工艺。

2.3.2 正交试验及结果

根据预试结果，拟定4个因素，每个因素3个水平。因素水平表见表1。表1 因素水平表（略）

取三七药材（过30目）10.0g，共取9份按下面正交表回流提取。因为此表中无空白列，以重复数据估算误差，重复数为3［4］。三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1均为已知成分，因此在进行方差分析时采用综合加权评分法，将两者中含量最高的项共定为100，结果为其综合评分。实验方案及结果见表2。对以上结果进行方差分析。结果见表3。表2 正交试验设计及试验结果（略）表3 方差分析表（略）

2.3.3 结果

由表2直观分析可见，各因素对三七的提取率的影响结果是A>C>B>D，最佳水平组合为A3B1C3D2。

由表3方差分析可见，溶剂浓度对实验结果有显著性影响，其他因素对实验无显著性影响。故确定最佳提取工艺为溶剂浓度70%，溶剂用量为药材用量的4倍，回流2次，回流时间为每次1.5h。

3 讨论

本文采用胶束毛细管电色谱法测定三七中皂苷成分，具有样品前处理简单，操作简便，方法稳定，可同时测定几种成分，所得色谱图信息丰富等优点。

正交设计是优化制剂工艺的有效方法，该法方便、准确，可减少试验次数、节省试验时间和费用。本试验中的正交设计是根据药物特性及预试实验结果等因素综合考虑确定的。

【参考文献】

1 林景超，张永煜，崔健，等.我国三七产业的发展现状及前景.药业纵横，2005，14(2)：18.

2 杨伟，赵维良.峰胶束电动毛细管法测定西洋参中人参皂苷Rb1、Re的含量.中国中药杂志，2003，28(12)：1135-1137.

3 Lie Li，Jin-Lan Zhang，Yu-Xin Sheng.Liquid chromatographic method for determination of active saponins from Panax notoginseng in rat urine using solid-phase extraction.Journal of Chromatography B，2004，808177-183.

4 贺石林，王键，王净净.中医科研设计与统计学，第2版.长沙：湖南科学技术出版社，2003，299-300.

2 710069 陕西西安，西北大学分析科学研究所