抗纤灵颗粒对慢性肾衰药效学动物实验研究

Posted 2022-11-25 肾小球

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【摘要】目的观察中药抗纤灵颗粒对大鼠试验性慢性肾衰的药效作用，探讨此方改善肾小球硬化、肾间质纤维化的机制。方法设立对照组、模型组、抗纤灵组、大黄组、丹参组共5组。服药30天。采用SPSS分析，血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）用药治疗前后指标及胆固醇（CHL）、甘油三酯（TG），各组间指标的变化和进行肾脏组织形态学观察。结果模型与抗纤灵组比较：Scr、BUN指标明显降低（P<0.05），各治疗组间的比较：抗纤灵组Scr、BUN指标均低于丹参组和大黄组。TG抗纤灵组与模型组比较，P<0.05。肾组织形态可见：抗纤灵组肾衰大鼠肾小球萎缩明显减轻，机构较接近正常。结论抗纤灵颗粒对改善试验性慢性肾衰有较明显的药效作用。

【关键词】抗纤灵颗粒；动物实验；慢性肾炎；肾间质纤维化

Research about animal experiment of Kang Xian Ling Ke Li （KXLKL） on chronic renal failure in pharmacodynamics
HOU Wei-guo，TU Li-qun，HE Li-qun，et al.

Department of Nephrology，Shuguang Hospital Attached to Shanghai University of TCM，Shanghai 200021，China

【Abstract】 Objective To observe the effect of pharmacodynamics of KXLKL on chronic renal failure in experimental rats and investigate the mechanism of its improvement of glomerulosclerosis and renal interstitial fibrosis. Methods Rats were randomly divided into control，model，KXLKL，Da Huang and Dan Shen（group） which were administrated for 30 days respectively. Analysis of SPSS adopted，Scr，BUN，serum cholesterol，triglyceride were measured before and after treatment and observation of renal morphology. Results Model group compared with KXLKL group: Scr，BUN，indexes were significantly decreased （P<0.05）. Compared to each treated group: Scr，BUN，indexes in KXLKL were significantly lower than that in Dan Shen and Da Huang. Triglyceride in KXLKL was lower than that in model group （P<0.05）. Renal morphological structures were showed: glomerule atrophy of KXLKL in rats with chronic renal failure and multiple interstitial connective tissues were significantly mitigated，which were close to normal. ConclusionKXLKL may have obvious effect of pharmacodyranics on improvement of experimental chronic renal failure.

【Key words】 Kang Xian Ling Ke Li； animal experiment; chronic renal failure； renal interstitial fibrosis

慢性肾功能衰竭（Chronic renal failure，CRF）是临床常见的危重病种之一。虽然肾脏病学在透析、移植和非透析治疗等方面有很大的发展，然而，CRF治疗中还存在不少问题，如CRF早、中期防治尚不得力，透析的非生理性，移植配型方法的不完善及供肾不足等。在多年临床经验的基础上，研制成了在扶正祛邪基础上着重活血化瘀、祛湿浊的抗纤灵方。经临床研究证明抗纤灵能显著降低CRF患者的肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）及胆固醇（CHL）、甘油三酯（TG），改善肾功能的作用。故考虑进行动物实验研究，以明确其疗效和机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD雄性大鼠（180～200g）由上海必凯中心提供。

1.2 实验方法大鼠分笼饲养于温室，12h日照，45%湿度的环境中，自由饮水，进食标准普通饲料。适应1周后用Platt 法5/6肾切除作大鼠慢性肾衰竭模型［1］，分两期完成，先背部切口切除左臂2/3，缝合后切除整个右肾。假手术组仅背部切口分2次剥离左右肾包膜，保留肾上腺。

1.2.1 动物分组设计分为5组（假手术对照组“A”4只，模型组“B”6只，抗纤灵组“C”6只，大黄组“D”4只，丹参组“E”4只），其中造型组、治疗组大鼠根据手术后2周所测血肌酐值分组，经统计学处理使分组后各组血肌酐、尿素氮值无明显差异。
1.2.2 治疗方法 C组予抗纤灵方：丹参15g，制大黄12g，炒牛膝15g，桃仁12g，全当归15g。D组予制大黄12g。E组予丹参15g。按成人常规用量的20倍给药。4组大鼠均按1.5ml/100g体重进行灌胃，A、B组给予等量生理盐水。C、D、E组大鼠连续灌服30天（实验中E组有一鼠死亡），A、B、C、D组分装部分血清于-20℃冰箱保存以备监测。取出肾脏，固定于10%福尔马林缓冲液中，石蜡包埋，切片，HE和PAS染色。

1.2.3 观察指标肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、胆固醇（CHL）、甘油三酯（TG）、肾组织结构。

1.3 统计学方法试验结果以SPSS软件进行t检验，设P<0.05提示具有统计学意义。

2 结果

2.1 抗纤灵对CRF大鼠肾功能的作用见表1。表1 抗纤灵对CRF大鼠血肌酐、尿素氮的作用（略）注：治疗前各手术组与假手术组肌酐、尿素氮比较，*P<0.05；手术各组治疗前比较肌酐、尿素氮，△P<0.05；治疗后各治疗组与模型对照组B比较，**P<0.05

2.2 抗纤灵对CRF大鼠血脂的作用见表2。表2 抗纤灵对CRF大鼠血脂的作用（略）注：各手术组与假手术组A组比较，*P<0.05；各治疗组与对照组B组比较，△P<0.05；胆固醇C组低于B组，但P>0.05无明显差异； D、E组与C组在两项指标比较，P>0.05；甘油三酯抗纤灵组D组与对照组B组比较，△P<0.05

2.3 光镜下肾组织机构观察

2.3.1 A组肾脏发育正常，肾皮质内肾小球形态、结构正常，每一低倍镜视野内有6～8个肾小球，呈球形、染色弱嗜碱性。肾小管壁较厚，管腔较小。肾小管之间间质含量少。（HE10×10）

2.3.2 B组同样的视野内，只有1～2个肾小球，结构基本正常，其余较多5～6个肾小球变化，肾小囊腔扩大，囊周纤维化，肾小球间距缩小。肾小管壁薄，管腔扩大、缩小相间隔，并可见蛋白管型和红细胞管型。间质结缔组织增生，并有大量炎症细胞浸润。肾血管壁增厚，管壁玻璃样变性。肾包膜增厚。（HE10×4）

2.3.3 C组同样的视野内，有6～7个肾小球结构基本恢复正常，肾小囊扩大减轻，囊周纤维化减轻。肾小管结构也较正常，管壁较厚，间质结缔组织增生明显减少，少量蛋白管型。间质有少量炎症细胞浸润。（HE10×4）

2.3.4 D组同样视野内，有4～5个肾小球结构基本正常，2～3个肾小球囊腔扩大，肾小管壁薄，管腔轻度扩大，少量蛋白管型。间质结缔组织增生，间质有少量炎症细胞浸润。（HE10×4）

2.3.5 E组同样的视野中，有4～5个肾小球结构基本正常，2～3个肾小球囊腔扩大，肾周纤维化。肾小管壁薄，管腔轻度扩大，见蛋白管型。间质结缔组织增生，间质有少量炎症细胞浸润。（HE10×10）

3 讨论

慢性肾衰临床症状多有乏力、纳减、恶心、呕吐、瘙痒、出血倾向变化。现代医学发现，这些症状的出现和加重均与尿毒潴留关系密切［2］，而中医把类似症状归于湿浊范畴。湿浊应包括水湿和浊毒。按中医理论，在生理上血水同源，在病理上血水互相影响，互为因果。另一方面肾失开合，清浊不分，当升不升，当降不降，当藏不藏，当泄不泄，精液不摄而漏出，水浊不泄而滞留，浊毒内蕴，或伤络，血行不畅而致瘀，或化热煎熬津血致瘀。故临床多见湿浊瘀血相夹杂的证候，在治疗时也应相辅相成，活血化瘀，祛湿化浊并用［3］。本试验通过测定Scr、BUN以反映当肾功能衰竭后导致的肾毒素滞留。发现用以丹参与制大黄为主药的抗纤灵治疗后的肾衰大鼠Scr、BUN明显低于造模对照组。用此方主药制大黄治疗后的肾衰大鼠BUN明显低于造模对照组，而Scr无明显差异。用另一主药丹参治疗后的肾衰大鼠Scr明显低于造模对照组，而BUN无明显差异。另外抗纤灵组治疗后Scr明显低于治疗前，有统计学意义，BUN亦低于治疗前。而造模对照组Scr、BUN随着试验的进展呈升高趋势，显示CRF如不积极治疗肾功能呈进行性恶化状态。用单味药制大黄治疗后Scr、BUN低于治疗前。用丹参治疗后Scr明显低于治疗前，有统计学意义。各治疗组之间，抗纤灵Scr、BUN均低于丹参组和大黄组。说明在扶正祛邪基础上着重活血化瘀的抗纤灵复方能有效促进机体对病毒的清除，延缓肾功能的恶化，其作用优于单味丹参、制大黄，其协同作用机制又待进一步药理研究证实。本试验，从侧面证实活血化瘀、祛湿化浊并用的治疗方法（如抗纤灵方）在一定程度上优于单用活血化瘀法，或单用祛湿化浊法。笔者认为抗纤灵能降低CRF大鼠Scr、BUN可能与方中多味活血药改善肾血流动力学从而减少肾系膜细胞和毛细血管的内皮细胞敏感性有关［4］。

各种类型的肾脏疾病中存在着脂质代谢异常，临床慢性肾衰患者主要表现为高甘油三酯血症（TG）、高胆固醇血症（CHL）［5］。目前认为高脂血症诱发和/或加重肾小球损伤的机制可归纳如下：（1）高脂血症，特别是高胆固醇、低密度脂蛋白，可使组织内饱和脂肪酸增多，多聚不饱和脂肪酸减少，从而改变两者比例，导致肾小球内系膜细胞和毛细血管壁的内皮细胞的细胞膜流动性减低，使这些细胞对血流动力学敏感性增强，导致系膜细胞增殖和细胞外基质分泌增多。使上述细胞合成前列腺素功能紊乱，使血栓素A2分泌增加，而使PGI2分泌减少，诱发血小板聚集，微血栓形成，造成肾小球损伤。（2）由于高脂血症，经肾小球超滤后肾脏局部呈现高浓度胆固醇、低密度脂蛋白，促进单核巨噬细胞和嗜中性白细胞浸润，并使巨噬细胞成为补充脂质的泡沫细胞，泡沫细胞呼吸爆炸，使氧化的LDL能刺激巨噬细胞产生生长因子、细胞因子和其他能刺激胶原合成的系膜细胞增殖的介质。（3）脂质对系膜细胞有直接损伤作用［6］（这一系列机制亦符合中医瘀、浊概念）。本试验结果：造模大鼠的TG、CHL显著高于假手术组（P<0.01），表明CRF大鼠存在着脂质代谢异常。用抗纤灵治疗的CRF大鼠TG明显低于造模对照组（P<0.05），CHL亦低于造模对照组。单味药制大黄、丹参治疗CRF大鼠TG、CHL都有明显的下降，但由于样本数目有限所以统计学上无意义。

各种肾病病变不论其始发因素，进展至CRF阶段有共同的病理特征，即肾小球硬化，细末机制增多和肾小管间质纤维化。其病理表现为肾小球缩小，肾小球毛细血管袢萎陷甚至消失，基底膜增厚，毛细血管闭塞，细末机制增多，肾小囊可见扩张，亦可见狭窄及闭塞。肾小管萎缩，间质炎症细胞浸润，纤维组织增生［7］。我们应用Platt法制作的肾衰动物模型，肾组织病理变化表现为肾小球体积变小，肾小囊腔扩大、囊周纤维化，肾小球间距缩小。肾小管壁薄，管腔扩大，缩小相间隔，并可见蛋白管型和红细胞管型。间质结缔组织增生，并有大量炎症细胞浸润。肾小管壁增厚，管壁玻璃样变性，肾包膜增厚。这些病理表现均说明了我们成功研制了慢性肾衰、纤维化的动物模型。用抗纤灵方治疗的肾衰竭大鼠肾小球萎缩明显减轻，结构接近正常，小管结构基本正常，少量蛋白管型和红细胞管型，间质结缔组织增生明显减少，轻度炎症细胞浸润。用单味药治疗组大鼠肾纤维化亦有所减轻。由此说明抗纤灵改善慢性肾衰的机制之一可能就是通过减轻炎症浸润，改善肾小球硬化、肾间质纤维化实现的。

【参考文献】

1 包玉生. 慢性肾功能衰竭动物模型.国外医学·泌尿系统分册，1994，14：66-69.

2 叶任高，沈清瑞.肾脏病诊断与治疗学.北京：人民卫生出版社，1995，519-521.

3 关明智. 慢性肾功能衰竭中医研究进展.甘肃中医，1997，10：46.

4 姚健，黎磊石. 大黄素对培养人肾小球系膜细胞速接蛋白产生的抑制作用.肾脏病与透析肾移植杂志，1994，3：349.

5 张景虹，黎磊石.大黄对慢性肾衰者脂质代谢的影响.中华肾脏病杂志，1993，9：133.

6 王海燕，刘平，张鸣和.肾脏病学，第2版. 北京：人民卫生出版社，1998，516-523.

7 蒋季平，范亚平.慢性肾功能衰竭的发病机制和对策. 中华肾脏病杂志，1994，10：174