简述单克隆抗体的主要技术路线。
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篇首语:虚心使人进步,骄傲使人落后,我们应当永远记住这个真理。本文由小常识网(cha138.com)小编为大家整理,主要介绍了简述单克隆抗体的主要技术路线。相关的知识,希望对你有一定的参考价值。
单克隆抗体的制备
①动物免疫与亲本细胞的选择;②细胞融合:淋巴细胞杂交瘤的制备;③杂交瘤细胞的筛选:有限稀释法等
④单克隆抗体的制备和冻存;⑤单克隆抗体的纯化
亲本细胞的选择
①骨髓瘤细胞:一般不分泌抗体,能在体外无限繁殖和连续继代培养,且为HGPRT-(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)或TK-(胸腺嘧啶核苷激酶)缺陷。多用BALB/C小鼠的骨髓瘤细胞。
②淋巴细胞:经过免疫处理的淋巴细胞,多用大鼠或小鼠。
③免疫方法:对细胞或微生物抗原可直接注射如小鼠体内,可溶性蛋白抗原可与等量的福氏完全佐剂混合乳化后,注入到动物体内。
细胞融合:将免疫脾细胞和小鼠骨髓细胞以2:1或10:1的比例混匀于50ml锥形离心管内,1200rpm离心;10分钟,尽量吸净上清液,用手指轻击管壁,使管底沉淀的细胞铺展成薄层,在室温条件下边轻轻振摇离心管边在60秒钟内逐滴加入50%的PEG0.5ml,随后静置90秒,再于5分钟内边振摇边逐滴加入5-10ml不含血清的培液或盐水缓冲液,以终止PEG的作用,再静置10分钟。
HAT培养基筛选杂交瘤细胞
细胞团块分散后,加HAT溶液,即可加入有饲养细胞的96孔塑料培养板内每孔0.1ml,用HAT选择性培养时隔4-5天换液,8-10天后可以选择检测。
HAT选择系统:HAT是含一定浓度次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)及胸腺嘧啶核苷(T)的一种选择性培养基,其中三种成分与细胞DNA合成有关。
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