举出两种以上人工细胞同步化的方法,并说明优缺点。(任意2种方法)
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①.有丝分裂选择法:有丝分裂细胞与培养皿的附着性低,振荡脱离器壁收集。优点:操作简单,同步化程度高,细胞不受药物伤害。缺点:获得的细胞数量较少。(分裂细胞约占1%~2%)
②.细胞沉降分离法:不同时期的细胞体积不同,可用离心的方法分离。优点:可用于任何悬浮培养的细胞。缺点:同步化程度较低。
③.DNA合成阻断法:选用DNA合成的抑制剂,可逆地抑制DNA合成。常用TDR双阻断法,在细胞处于对数生长期的培养基中加入过量TDR,S期细胞被抑制,停在G1/S交界处。移去TDR,释放时间大于TS时再次加入过量TDR。优点:同步化程度高,几乎将所有的细胞同步化。缺点:产生非均衡生长,个别细胞体积增大。
④.中期阻断法:利用破坏微管的药物(如:秋水仙素、秋水仙酰胺)将细胞阻断在中期。优点是无非均衡生长现象,缺点是可逆性较差。
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