现代科学技术 组织培养应用实例

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篇首语:曾无好事来相访,赖尔高文一起予。本文由小常识网(cha138.com)小编为大家整理,主要介绍了现代科学技术 组织培养应用实例相关的知识,希望对你有一定的参考价值。

  例1,杜鹃花的快速繁殖

  杜鹃花是较常见的园艺花卉,品种多栽培容易,通过侧芽增殖的技术,能在一年内生产几十万株小苗投放市场。具体的方法如下:

  外植体的准备:取健壮的嫩枝,去叶后切取顶部1.0~1.5厘米的切段,先用肥皂水洗净,再在1%~2%的安替福民溶液中灭菌10~15分钟,用无菌水冲洗3次,将灭菌后的茎段接种在1/2的Andereson无机盐+2毫克/升异戊基腺苷+0.5毫克/升吲哚乙酸,3%蔗糖的液体培养基中培养。几周后侧芽生长到1~2厘米。

  Anderson培养基配方(单位:毫克/升):

  NHNO400,KNO480,MgSO·7HO370,MnSO·HO16.9,ZnSO·7HO8.

  42CaCl·2HO440,KIO.83,COCl0.83,HBO6.2,NaHPOHO380,

  242FeSO·7H55.7,Na-EDTA74.5,维生素B0.4,肌醇100。

  第一阶段的继代培养:将上述1~2厘米的侧芽切下后接种含有1.5毫克/升异戊基腺苷+4毫克/升吲哚乙酸的1/2Anderson培养基中,当新的嫩枝产生时,形成大量的不定芽。这些芽切割后在相同培养基中连续继代培养几次。

  第二阶段的继代培养:这一阶段将得到的芽或嫩枝接种在1~15毫克/升的异戊基腺苷+0.5~4毫克/升吲哚乙酸的Anderson固体培养基中(加0.8%琼脂),激素浓度按品种而异。每二个月每个培养的芽就可生长成20~40个嫩枝。

  生根和移栽:有两种方法可使用,一是将嫩枝直接扦插于自然条件下的人工基质中(砂、蛭石、锯末等),保持湿度,促使生根。另一种方法是转移到1/3Anderson培养基中,除去异戊基腺昔和碘化钾,加0.5毫克/升吲哚丁酸和600毫克/升的活性碳,一个月后就可产生根系。培养基的pH值为4.5。幼苗移栽后要保持高湿度,防止高温和阳光直射,土壤或人工基质的通气性良好,以利于幼根的生长,提高幼苗移栽的成活率。

  例2.葡萄脱病毒苗的生产

  从葡萄园中采取刚萌芽的茎尖(1~2厘米),用1.2%次氯酸钠+0.1%“吐温20”表面消毒灭菌10分钟,用无菌水冲洗3次,在超净工作台上,双筒解剖镜下进行仔细剥离。用自制的解剖针(最细的绣花针固定在玻棒上即可)效果较好,剥去幼叶,露出圆滑的生长点,用自制的解剖刀(取双面刀片的一部分固定在玻棒上)仔细切取所需的茎尖,随即接种于培养基中。茎尖为0.5~1毫米,带1~2个叶原基;培养基为MS配方,加入大量元素、微量元素、甘氨酸和维生素,加入3%蔗糖,0.8%琼脂,pH调为5.8,0.1mg/L的萘乙酸和1.0mg/L的6苄基腺嘌呤。

  热处理是将上述接种的茎尖,立即放置于27℃,光照15小时加35℃,黑暗9小时的条件下培养,经7天热处理后,转移至25℃下,光照15小时的条件下培养。经过21天的培养,茎尖生长,出现小叶片,成为2厘米左右的小茎段。

  在培养至18、21、25、31天时分别取样,在6kV加速电压的PSEM500型扫描电子显微镜下观察制备的新叶片细胞中是否含有病毒。在确认已脱病毒后,应用快速繁殖侧芽生长的技术,大量繁殖脱病毒葡萄苗。

  葡萄的快速繁殖侧芽使用的培养基配方为MS+1.0mg/L6-苄基腺嘌呤+1.0%mg/L吲哚乙酸。当侧芽长到一定数量后,将切段转移到诱导生根的培养基中,即1/2MS+0.1mg/L6-苄基腺嘌呤+1.0mg/L的萘乙酸。

  形成根系的葡萄试管苗,经20天左右生长,具有5~8张叶片的小植株。此时可将培养温度降至20℃,光照强度增加到500勒克斯以上,同时打开盖子,进行5~7天的炼苗。

  炼苗后进行移苗,小心洗去根系琼脂,将小苗移到以锯末为支持基质的苗床上,用1/10的MS液体培养基浇苗,并覆盖塑料薄膜进行保湿,昼夜温度15~25℃,避免阳光直射。当小苗长出2~3张幼叶时,可用稀人粪尿+10%尿素施肥,25~40天后可投放市场。为防止移苗过程中被病毒媒介再侵染,应在苗床四周布置昆虫网,防止昆虫的叮咬。

  茎尖培养加热处理进行葡萄脱病毒苗生产,其脱病毒率可高达90%以上。

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